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- 2019-05-26 发布于上海
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沙丁胺醇胶体金免疫层析试纸条的研制及其应用
摘 要
沙丁胺醇是一种人工合成的选择性β-受体激动剂药物,也是治疗平喘类疾病的药物。 这种物质非法使用于动物饲养中,可以提高瘦肉率,但是人们食用含有沙丁胺醇含量高的 动物组织后,会有头痛、神经过敏、心悸等症状,严重会损伤肝脏,威胁着人们的身体健 康。目前,沙丁胺醇的检测标准是色谱法,此方法样品前处理复杂,需要大型仪器和专业 人员操作,耗费时间长。胶体金免疫层析技术是一种将胶体金作为标记物免疫学分析技术, 应用于食品安全、生物技术、农业科学、人类医学等领域,此技术优点是反应快速、灵敏, 操作简单方便,成本低易于工厂化生产。本研究旨在建立一种沙丁胺醇的胶体金免疫层析 检测方法。
通过采用柠檬酸三钠法制备两种不同粒径的胶体金溶液,将具有沙丁胺醇特异性的金 标探针均匀喷在 GL0194 型的玻璃纤维素膜上,烘干后即为金标垫。经比较试验选用 Millipore 135 硝酸纤维素膜作为层析膜;控制线(T 线)选用 1.0 mg/mL 的羊抗兔 IgG;用 浓度为 0.6 mg/mL 的沙丁胺醇包被抗原(SAL-BSA)喷涂检测线(C 线),最后组装成试 纸条,并且对试纸条应用于动物组织和饲料样品前处理方法进行单因素优化,选出合适的 方案。
通过比较两种粒径大小不同的胶体金溶液进行最佳蛋白标记量、最适 pH 以及金标探 针制备的离心条件的确定,进而选择出适合沙丁胺醇的最佳胶体金溶液是在 100 mL 的 0.01%胶体金溶液中添加 1%柠檬酸三钠的量为 1.8 mL 所对应的胶体金粒径;通过紫外-可 见光分析和外观观察试验确定了金标探针的最佳蛋白标记量为 6 μg/mL,最适 pH 为 0.2
mol/L 碳酸钾的加入量为 8 μL/mL;金标复溶液的配方为 0.01 mol/L pH 7.4 的磷酸盐缓冲溶 液加 10%蔗糖、0.5%PEG、1%BSA 和 0.1%NaCl,稀释倍数为 6 倍;样品垫的处理液配方 为 0.01 mol/L pH 7.4 的磷酸盐缓冲溶液加 1%的蔗糖和 1%的吐温-20。样品前处理方案为动 物组织采用的前处理方法是 5%三氯乙酸水解和超声提取结合的方式,饲料采用的是 0.2 mol/L 磷酸-甲醇(V:V, 4:1)和超声提取结合的方法。单因素优化的结果为:样品用量为 2 g,提取液体积为 4 mL,超声时间为 8 min,离心时间为 5 min。用制备好的免疫层析试纸
条检测沙丁胺醇标准品与已知含量的沙丁胺醇的动物组织和饲料,检测限分别为 3 μg/L、
10 μg/kg 和 12 μg/kg,在其检测限范围内重现性为 100%,没有假阳性及假阴性出现。 对制备的沙丁胺醇试纸条的验证试验表明,该试纸条稳定性良好,对沙丁胺醇的特异
性强,可以很好地应用于动物组织和饲料样品的实际检测。 关键词:沙丁胺醇;胶体金;免疫层析试纸条;动物组织;饲料
I
Development and Application of Colloidal Gold Immunochromatographic Strip for the Rapid Detection of Salbutamol
Abstract
Salbutamol is a kind of the artificially synthesized beta-agonists and the drug of bronchial asthma clinically. It may be used illegally in animal feed to increased accretion of skeletal muscle mass. However, when people eat animal tissues that contain high content of salbutamol, there will be potential symptoms including headache, nervousness and heart palp
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