HPV-DNA标本处理的标准操作程序1.doc

×××院 临床分子生物实验室质量手册 文件编号： 序号： 共 2 页 第 版 第 次修改 主题：HPV-DNA标本处理的标准操作程序 颁 布 日 期： HPV-DNA标本处理的标准操作程序 一、目的： 规范临床分子生物实验室对临床标本的处理，提高检测结果的准确率。 二、适用范围： 人乳头状瘤病毒（HPV）基因微阵列分型检测试剂盒。 三、职责： 由临床分子生物实验室专业技术人员制定程序文件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。 四、程序： 1、将样本及阴性对照品置室温解冻，按习惯将标本编号，按相应数量取出样本管，对应编号。 2、有效细胞的收集： 2.1 对于宫颈脱落细胞标本，先振荡混匀临床样本10秒，取800?l临床样本加入样本管， 14000rpm离心5分钟，去上清液（若收集到的有效细胞太少的话，可再次吸取取800?l临床样本加入样本管，14000rpm离心5分钟，去上清液）； 2.2 对于男性标本（棉拭子），先加入1ml生理盐水，充分振荡洗脱细胞，倒出洗脱液，14000rpm离心5分钟，去上清液； 2.3 对于血液太多的临床标本，可将收集到的细胞用已灭菌的蒸馏水漂洗一次，再离心收集细胞。 3、加入400?l溶液Ⅰ(如果出现沉淀应在45 ℃水浴中预热)，将收集到的细胞振荡混匀，在100 ℃煮沸15分钟。 4、从沸水中取出样本管，点动离心，开盖，加入400?l溶液Ⅱ，混匀后，室温下放置2分钟后，14000 rpm离心5分钟，将上清液倒入废液缸，14000rpm离心1分钟，用200μl移液器，轻轻将剩余的上清液吸尽，枪头切勿碰到离心沉淀方向的管壁，以免将DNA吸掉。 5、开盖静置至少2分钟，加入60?l溶液Ⅲ充分溶解，静置10分钟。14000rpm离心1分钟取1?l样品做PCR检测, 或者贮存-20℃冰箱中备用。 HPV样本处理流程图 吸取振荡液800ul转入1.5ml 样本管内加入400ul溶液Ⅰ 吸取振荡液800ul转入1.5ml 样本管内 加入400ul溶液Ⅰ 14000rpm.离心5min 注意：一般震荡大约10秒钟。 充分振荡 取出临床采样标本 上机扩增 此标准操作变更程序：如果本操作程序使用者在实际工作中发现其存在问题，则应向科室负责人提出，科室负责人则召集所有与本程序有关的的人员讨论，以决定是否需要变更本程序。加入60?l溶液Ⅲ充分溶解，取1?l样品做PCR检测弃上清液，于室温下开盖放置至少2分钟沸水中取出样本,点动离心后加入400?l 上机扩增 加入60?l溶液Ⅲ充分溶解，取1?l样品做PCR检测 弃上清液，于室温下开盖放置至少2分钟 沸水中取出样本,点动离心后加入400?l溶液Ⅱ混匀，室温放置2分钟 保证溶液Ⅰ中无沉淀 14000rpm离心5min 100℃沸水浴15min 充分混匀 弃上清液 制 定 者 审 核 者 批 准 者 年 月 日 年 月 日 年 月 日