硕士研究生课程-免疫球蛋白分子.ppt

? 连接造成的多样性 (junctional diversity) CDR3区位于V、J和V、D、J片段连接处，两片段之间可插入或丢失数个核苷酸，增加了互补决定区（CDR3）的多样性。 N-氨基酸插入 V、D、J片段连接多样性 3‘端的CCTCC(Vλ) 和5’端的GTGG(VJ) 连接时，其中可取用9个核苷酸或6个核苷酸，分别编码3个或2个氨基酸，当取用6个核苷酸时，会有8种不同的组合。 N-氨基酸插入 加入的核苷酸是以非模板的方式插入，影响连接点后的核苷酸编码的读框，使重排无效（2/3）， 只有1/3成功，增加了抗体的多样性。 体细胞高频突变造成的多样性(somatic hypermutation) 成熟的B 细胞重排的V区基因，往往在抗原的刺激下发生点突变，突变的频率非常高（每次细胞分裂，大约每1000个bp中就有一对发生突变，而其他体细胞的突变频率为10-10bp。）。 称为体细胞高频突变。  有人计算多样性可达4.8 X 107 ，故针对外界众多的抗原分子，体内可产生数以亿计的不同抗体分子。 ? 免疫球蛋白的生物合成与组装 Ig主要由脾、淋巴结和其他淋巴组织内的桨细胞所产生。重链和轻链分别合成，然后装配。 Ig的合成过程：转录、mRNA剪切、合成重链和轻链；在粗面内织网装配四肽链；转运、加糖基、分泌胞外。 B细胞在抗原刺激后，最初只合成IgM，后合成IgG。 免疫球蛋白类型转换 指一个B细胞克隆在分化过程中V区基因不变，而CH基因片段不断发生重排，即识别抗原的特异性不变，但Ig分子的类和亚类发生变化。 ?Ag 机体 B细胞  先IgM（V—D—J—Cμ） 后IgG （V—D—J—Cγ） V区：V-D-J基因不变，识别抗体能力不变 C区：Cμ转换为Cγ，从IgM---IgG? 六．人工制备抗体 1.?多克隆抗体（Polyclonal antibody, PAb） 第一代 抗体 2. 单克隆抗体（Monoclonal antibody，McAb） 第二代抗体 3. 基因工程抗体（gentic engineering antibody） 第三代抗体  ?多克隆抗体 1 2 B1 Ab1 3 机体 B2 Ab2  B3 Ab3 蛋白质抗原 多种抗体的混合物 存在于血清与体液中 由含多种抗原表位的抗原刺激机体产生的免疫 血清，含多种抗体的混合物，称多克隆抗体。 单克隆抗体（McAb） 由识别一个抗原表位的B细胞克隆所产生的均 一的抗体。 特点：纯度高，特异性强。 两位科学家在1975年首创杂交瘤技术制造 McAb，并于1985年获诺贝尔奖。 1974年，Koehler在Milstein位于剑桥的实验开始博士后研究，两人为研究抗体的多样性，对抗体形成细胞与骨髓瘤细胞进行融合试验。 原 理 ① 小鼠骨髓瘤细胞（浆细胞瘤细胞）能在体外无限 制增殖和分泌无活性的Ig（单一）。② 小鼠脾细胞（富含B细胞）具有产生特异性抗体 的能力，但不能无限制繁殖传代。③ 采用融合剂将两种细胞融合成杂交瘤细胞，具有 亲代双方的特性：即能人工培养使之无限止增 殖，又可产生特异性抗体。④ 由于每一个B细胞克隆只针对一个抗原表位，产生