第十一章核酸代谢-.pptVIP

2005-12-23 *生物化学 主讲：李盛贤 第十一章 核酸代谢-2 DNA的复制与变异 DNA的复制及DNA的变异 主要内容： ?遗传信息的传递途径遵循 分子生物学的中心法则(central dogma) DNA RNA 蛋白质 复制 转录 翻译 反转录 RNA复制 一、DNA的复制 生物的遗传信息以密码的形式编码在DNA分子上，表现为特定的核苷酸排列顺序，通过DNA复制（replication）由亲代传递给子代。 （一）DNA的半保留复制（semicoservative replication） 在复制过程中首先碱基间氢键需断裂并使双链解旋和分开，然后每条单链可作模板在其上合成新的互补链，形成2个DNA互补双链。新形成的两个DNA分子与原DNA分子的碱基顺序完全一样。每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的,DNA的这种复制方式称为半保留复制 。 （二）参与DNA复制有关的酶和蛋白质 1. DNA聚合酶（DNA Polymerase） 参与DNA复制的酶：DNA聚合酶、DNA连接酶、旋转酶、解旋酶、单链结合蛋白、引发酶及一些蛋白质因子等。 DNA聚合酶：是催化以脱氧核苷三磷酸（dNTP）为底物（substrate）合成DNA的一类酶。 原核细胞和真核细胞DNA聚合酶的种类和作用有所不同 。 DNA聚合酶催化的反应： ndATP ndGTP ndCTP ndTTP 模板（DNA），引物（RNA，DNA） DNA聚合酶 DNA ＋ 4nPPi DNA聚合酶的作用机理 在大肠杆菌中至少发现了五种DNA 聚合酶，分别是DNA 聚合酶 I、II、III、IV和V，其中聚合酶 I发现最早（1956年），而聚合酶IV和V到1999年才发现。 （1）原核细胞DNA聚合酶 DNA polymerase I（pol I）：1956年Kornberg等在Ecoli中发现的第一个DNA聚合酶，是DNA复制研究中的重要里程碑， Kornberg因此获得1959年诺贝尔化学奖。 ★ DNA pol I 也称Kornberg酶, Mr 103 Kd, 一条多肽链,一个锌原子（活性所必需），每个E.Coli细胞内大约有400个分子的pol I。 ① 5′→3′聚合作用 ② 3′→5′核酸外切酶的活性 ③ 5′→3′核酸外切酶的活性 ④焦磷酸解作用 ⑤焦磷酸基交换的作用 因此DNA pol I属于多功能酶 功能： 5′→3′聚合作用： DNA pol I 不能“从无到有”进行合成，只能从已有的多核苷酸链的3′-OH端延长DNA链，即必须要有引物（ Primer ）, 引物多为RNA，少数情况下是DNA，引物必需具有游离的3′-OH。 单链线状DNA 单链环状DNA B. 局部变成了单链 的双链DNA D.有缺口（gap）的双链DNA 模板－引物 5 3 5 3 A.单链DNA 5 3 3 3 5 缺口填充 3 3 C. 有切口（nick）的双链DNA 模板： 注意：完整的双链DNA不能作模板。 Pol II是由一条Mr为88Kd的多肽链组成，它的活性约为pol I的5%，也要模板和带3′-OH末端的引物，最好的模板是有gap的双链DNA，有3′→5′核酸外切酶的活性，无5′→3′核酸外切酶的活性，主要用于DNA的修复。 ★ DNA Polymerase II（DNA pol II）： 1970年和1971年先后分离出pol II和pol III。 是由多种蛋白质组成的复合物, Mr 高达900Kd。 每个E.coli约含10分子DNA pol III，虽然量很少，但活性很强，为pol I的15倍，模板和pol II大致相同，有3′→5′核酸外切酶的活性，但无5′→3′核酸外切酶的活性，DNA pol III是原核细胞DNA复制的主要酶。这个酶的缺陷株往往是致死的。 ★ DNA polymerase III(DNA pol III)： ★ DNA polymerase IV和V（DNA pol IV和V）： 1999年才被发现，涉及DNA的错误倾向修复，当DNA受到严重损伤时，即可诱导产生这两种酶。但修复缺乏准确性，因而出现高的突变率。 大肠杆菌三种DNA聚合酶的比较 复制（5→3聚合作用） 修复 校正，修复，去除RNA引物 功能 － － ＋ 5→3外切酶活性 ＋ ＋ ＋ 3→5外切酶活性 ＋ ＋ ＋ 5→3聚合酶活性 15 0.05 1 生物学活性 10 100 400 每个细胞的分子数