狗肠新生物活性肽的分离纯化及结构测定.pdfVIP

1 绪论绪论 绪论绪论 1.1 胃肠肽研究概况胃肠肽研究概况 胃肠肽研究概况胃肠肽研究概况 十九世纪早期 Leuret和Lassaigne发现狗小肠上端酸化时可引起胰腺分泌一种循 环物质 但当时这一发现并没有引起足够的重视 直到十九世纪末 在Povlov 的实验 室中再次观察到该现象 才开始对这它进行研究 1902年英国两个著名的生理学家 Bayliss和Starling首先确认该循环物质就是胰液素 secretin [1 2] 他们很快意识到 他们所发现的不仅是一个传递化学信息的新物质 而且是一个关于机体活动的体液的 新领域 1902-1904年间 通过一系列的实验证实了促胰液素的生理特性即是调节胰腺 的碳酸氢钠分泌 1905年 他们创制了一个新名词 激素 hormone 来称呼这一类 传递信息的化学物质 胰液素是第一个被发现的激素 继胰液素后 1905年Edikins发现了调节胃酸分泌的胃泌素 gastrin [3] 1928年 Ivy Oldberg [4] 1930 Kosaka Kim 和 发现了调节胆囊收缩的胆囊收缩素 年 和 发现了肠抑 胃素(GIP) 这些经典的胃肠激素的发现是胃肠内分泌学发展上的一个历程碑 为胃肠 生物活性肽的研究开辟了道路 六十年代后 随着蛋白质化学的发展 特别是以下三种技术的发展 为胃肠肽生 物化学的快速发展作出了贡献 1 放射免疫分析法 放射免疫分析法是一种已证明对检测微量肽类激素 如血 液中的肽类激素 行之有效的方法 这是一种竞争结合分析的方法 即放射性标记的 抗原 如肽类激素 和分析样本中未标记的抗原与能识别该抗原的抗体进行的竞争性 结合 分析样本中特异性抗原的量可以由标记抗原自抗体被置换的程度测量和计算出 来 应用该法已鉴定了许多激素前体的分子式 包栝大胃泌素 肠胰高血糖素 胆囊 收缩素CCK-58和许多其他已知的大分子式激素 2 先进的生物化学纯化技术 应用凝胶过滤 免疫亲和色谱 高效液相色谱以 及快速蛋白液相色谱等技术并结合放射免疫分析和肽类微量测序技术可使纯化过程 大大简化 1 3 重组DNA技术 在阐明肽类激素和其前体蛋白的结构方面 重组DNA技术拓 展了先进的生物化学纯化技术的用途 利用遗传密码 有可能合成互补于编码某种肽 类激素mRNA 的寡脱氧核苷酸序列 并由此获取关于结构的信息 以该寡脱氧核苷酸 序列为探针 可对含有与组织中某种肽类激素mRNA 互补的cDNA 的重组细菌或病毒 克隆 文库 进行筛选 这样便可分离出编码这种肽的互补DNA (cDNA) 从cDNA 的核苷酸序列即可推论出这种肽类激素及其前体的结构 应用同样的方法也可阐明肽 类激素受体的结构 此外 还用纯激素建立了免疫荧光方法 免疫细胞化学方法阐明许多胃肠内分泌 细胞及其分布情况 这些都对于发展胃肠内分泌学起了极其重要作用 又有许多新的 胃肠肽被提取出来 并阐明了化学结构和人工合成 如 RA Gregory 和Tracy 于1964 年首先提纯并确定了小胃泌素 17肽胃泌素 [5 6] 的化学结构 继而还分离和测定了 34 人和猪的大胃泌素 肽胃泌素 的化学结构 发现每种胃泌素又成对地存在着 两种形式[7 8] 他们还阐明胃素瘤内的胃泌素本质 他们对这一激素的突破 彻底 解决了多年热烈争论的究竟有没有胃泌素 胃泌素是不是组织胺这个问题 他们把胃 泌素科学地确定为一个真正的胃肠激素 影响巨大 RA Gregory 和Tracy于1967-1970 年间 首先阐明胆囊收缩素的化学结构 继而又阐明胆囊收缩素的化学