新的STR遗传标记及荧光标记复合扩增的法医学应用研究.pdfVIP

四川人学硕J二论文 贾振军 前占 新的STR遗传标记及荧光标记复合扩增的 法医学应用研究 前言 STR复合扩增(mutiplexPCR，也称多重PCR)技术自1988年 Chambercian等首次提出这一概念起，已被广泛应用于基因组结构与 功能及数量性状基因座的定位等研究。复合扩增技术的特点有：①高 效性，在同一PCR反应管内同时检出多种型别的目的基因。②经济 简便性，多种目的基因在同一反应管内同时检出，将大大节省时间， 节省试剂，节约经费开支，提供更多更准确的诊断信息。在法医学领 域，要求在尽量短的时间内对多个遗传标志作出分析结果，而且法医 的生物学检材常常是微量和不可再现的，复合扩增技术的应用凸显其 无法代替的重要性。 本课题旨在寻找应用于法医学STR基因座并建立D20S601、 D6S474、D6S2418荧光标记复合扩增体系，按照美国DNA分析方法 技术工作组(The onDNA TechnologyWorkingGroup Analysis Methods，TWGDAM)的指导方案进行法医学实用性研究。 四川大学硕士论文 贾振军 第一部分 五个常染色体STR分子遗传标记多态性研究 tandem 短串联重复序列(short repeat，STR)不仅是绘制基因组物理 图谱和遗传连锁分析的理想标记，也是群体遗传学和法医遗传学高信息 基因座的丰富来源。近年来，国外学者报道了一些新的法医STR遗传标 记…，但缺少中国大陆人群的群体遗传数据。为了解中国人群5个新的 法医STR基因座等位片段结构特征，获得中国汉族群体D2S2955、 课题中，我们分析了这五个常染色体STR基因座的等位基因序列，按照 InternationalofForensicGenetics，简称 国际法医遗传学会(the Society ISFG)推荐的等位基因命名原则，对这些常染色体STR基因座的等位基 因进行命名；并调查这些基因座在成都汉族群体的等位基因频率，为提 高常染色体遗传标记的个人识别能力和非父排除能力提供新选择。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1群体样本 120份EDTA抗凝血采自中国成都地区无血缘关系汉族个体，．200c 保存。 1．1．2试剂 Genome 五个基因座查自GDB(TheDatabase)数据库 称和引物序列见表1—1。 四川1人学硕十论文 贾振军 表1-15个常染色体STR基因座的基本参数 基因座 基因库号 引物序列 K (Pharmacia，瑞典)、丙烯酰胺(分析纯，国产)、甲叉双丙烯酰胺(Fluka， 硼酸(分析纯，国产)、硫酸(分析纯，国产)、EDTA(分析纯，国产)； 其余试剂均为国产分析纯。 1．1．3仪器 德国)、恒温摇床、水浴箱、ABl310自动测序仪(ABI公司，美国)。 四川大学硕士论文 贾振军 1．2方法 1．2．】DNA提取 Chelex法提取DNA[21(具体步骤见附录1)。 1．2．2 PCR扩增 u PCR反应体系：总体积37．5 dNTP、 l，DNA模板约3ng、0．2mM mM 1．5u Xbuffer