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副干酪乳杆菌葡萄糖苷酶的表达纯化及酶学性质研究谢玉锋韩雪梅路福平省部共建食品营养与安全国家重点实验室天津科技大学生物工程学院天津哈尔滨学院食品工程学院哈尔滨摘要为了实现糖苷类物质的高效转化将来源于副干酪乳杆菌葡萄糖苷酶基因连接于表达载体上在中表达重组酶经镍离子亲和层析分离得到纯酶其相对分子量和比酶活分别为和最适作用温度和分别为和和对葡萄糖苷酶酶活抑制作用最小几乎使其丧失催化活性其底物特异性较宽泛对大豆异黄酮栀子苷水杨苷七叶苷虎杖苷熊果苷均有降解作用以为底物时该酶的和分别为和催化系数为结果与分析表
副干酪乳杆菌β-葡萄糖苷酶的表达、纯化及酶学性质研究
1，2 1 1
谢玉锋 ，韩雪梅 ，路福平
（1. 省部共建食品营养与安全国家重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457；
2. 哈尔滨学院食品工程学院，哈尔滨 150086）
摘 要：为了实现糖苷类物质的高效转化，将来源于副干酪乳杆菌 （Lactobacillusparacasei）TK1501β-葡萄糖苷酶基因连
接于表达载体pET28a(+)上，在E.coliBL21 中表达，重组酶经镍离子亲和层析分离得到纯酶，其相对分子量和比酶活分别为
2+ 2+ 2+
86.63kDa和675.56U/mg。最适作用温度和pH 分别为30 ℃和6.5。Mg 和Ca 对β-葡萄糖苷酶酶活抑制作用最小，Cu 几乎
使其丧失催化活性。其底物特异性较宽泛，对大豆异黄酮、栀子苷、水杨苷、七叶苷、虎杖苷、熊果苷均有降解作用。以β-pNPG
-1 -1
为底物时，该酶的K 和 V 分别为1.44mM 和58.32mM s ，催化系数k 为3982 s 。结果与分析表明来源于副干酪乳杆菌
m max cat
TK1501β-葡萄糖苷酶对水解大豆异黄酮和合成糖苷将会发挥重要作用。
1 关键词：副干酪乳杆菌 β-葡萄糖苷酶 纯化 酶学性质
v 中图分类号： 文献标志码： 文章编号：
6
4
1 Expression, Purification and Enzymatic Properties of β-glucosidase from Lactobacillusparacasei
0
0 1，2 1 1
. XIEYufeng ，HAN Xuemei ，LU Fuping
2 (1.StateKey Laboratory ofFoodNutrition and Safety,CollegeofBiotechnology,TianjinUniversity of ScienceTechnology,Tianjin
1
8 300457,China；
1 2.CollegeofFood ScienceandEngineering,HarbinUniversity,Harbin 150086,China)
0
2 Abstract: To improve the conversion efficiency of glucoside to small molecule compounds,the gene encoded β-Glucosidase from
: Lactobacillus paracasei TK1501 was inserted into pET28a(+), and
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