蛋白质3-分子量SDS-PAGECBR染色法.pptVIP

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Protein蛋白質4-分子量SDS、 CBR染色法 分子量SDS實驗原理: SDS(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)為變性(denature)的蛋白質電泳,可依分子量分離出不同大小的蛋白質成分,其後以CBR染色或銀染判讀結果。 實驗材料: Acrylamide + bis-acrylamide ( 37.5 : 1 )、APS (ammonium persulfate)、TEMED、Running buffer及Sample buffer。 儀器:SDS電泳槽套組、電源供應器。 實驗方法: a. 樣品前處理-取樣品與sample buffer等量混合,水浴95℃,5mins後快速離心取上層液。 b. 電泳操作-架設電泳裝置套組,將running buffer倒入電泳槽中,取下孔梳,分別將處理好的樣品各12μl注入well內。蓋上電泳槽,連接電極線於電源供應器,調整電壓至80 V開始跑電泳約30 mins,至上下膠體間集膠,後電壓調至120 V,由追蹤染劑觀察蛋白質泳動情形,接近膠體底部時停止電泳。 CBR染色法 實驗原理: 利用(1) coomassie Brilliant R-250分子上的芳香苯環與蛋白質分子上疏水性的區域結合; (2) coomassie Brilliant R-250分子上的亞硫酸基團(-SO32-)與蛋白質分子的正電荷結合,而使蛋白質染出藍色的色帶。 實驗材料: CBR染色液: coomassie Brilliant R-250 0.75 g methanol 250 ml acetic acid 50 ml milli Q water 200 ml CBR脫色液: 20% methanol 10% acetic acid in milli Q water 儀器: 乾淨塑膠盒、玻璃片、玻璃紙 實驗方法: 1. 將電泳後之膠片浸入CBR染劑中20~30 min。 2. 倒出染劑,以自來水清洗後以CBR脫色液退色至蛋白質色帶清楚呈現為止。 3. 封膠、放乾。

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