反式脂肪酸测定.doc

PAGE PAGE 2 反式脂肪酸測定 原理： 甲基酯化：利用Tetramethyl ammonium hydroxide (TMAH) 對Triacylglycerol進行甲基酯化，降低脂肪酸沸點，以利氣化進行氣相層析儀分析脂肪酸組成。 利用氣體作為移動相攜帶氣化混合物，在固定相對混合物依極性的差異產生不同的吸附性與滯留時間，因此各成分物質在管柱內產生不同的移動速度以達到分離效果，再以檢測器燃燒氣體偵測電流變化。 氣相層析儀管柱介紹： Liquid PhaseCapillary Columns Liquid Phase Capillary Columns 管柱內塗上含右圖所示化合物之液態薄膜，因非極性支鏈較多，藉此將極性較高的脂肪酸分離出，隨著管柱溫度提升依序分離出極性較低的脂肪酸達到分離各脂肪酸的效果。 樣品前處理： 取1~4滴sample(需純油脂)加入有蓋的試管 ↓ 加入3ml乙醚溶解脂肪 ↓ 加入1ml TMAH ( Tetramethyl ammonium hydroxide )靜置反應10min ↓ 加入1ml蒸餾水終止反應，取上層有機層加入含有1g以上無水硫酸銅的eppendorf ↓ 取出去水後溶液至乾淨的小棕色瓶內 ↓ 進行G..C.分析 氣相層析儀操作步驟： 打開氮氣瓶，再開啟氣相層析儀、積分儀與烘箱電源 ↓ 設定管柱溫度梯度 ↓ 將N2壓力調至1 kg/cm2 ↓ 開啟H2與Air，並將壓力設至H2 = 1kg/cm2，Air = 0.2kg/cm2 ↓ 點火，確認有無燃燒後，將壓力調至H2 = 0.6kg/cm2，Air = 0.6kg/cm2 ↓ 設定積分儀 ↓ 注射標準品或樣品進行分析 注意事項： sample若油脂含量少或含雜質則先萃取油脂再定量 前處理完之sample需保存於 -20℃ 去除水分須完全，不可殘留任何水分 目的： 利用衍生化反應(甲基酯化)，降低油脂之沸點，再以氣相層析儀(Gas Chromatography)分析其脂肪酸組成，作為油脂種類及掺假判斷證據之一。 二.原理： 三酸甘油酯(Triglyceride；TG)在酸或鹼，可水解成甘油和脂肪酸。 層析法( Chromatography)的原理為溶質混合物在固定相(stationary phase)及移動相(Mobile Phase)中，因受到作用力大小不同，致使彼此分離者。 而氣相層析儀乃採用惰性氣體(N2、He等)為移動相，當移動氣體攜帶氣化的樣品通過管柱的固定相時，樣品中各成分彼此分離而先後流出，再利用H2 (g)、Air燃燒產生高溫(2100℃)將樣品離子化，當離子經過FID (Flame Ionization Detector)時，其導電度會隨離子增加而增加，藉此表現不同的滯留時間(Retention time)，以 由於油脂或脂肪酸的揮發性較低，不適合直接以氣相層析儀分析，一般都利用衍生化反應將其轉成沸點較低的甲基酯衍生物。 甲基化反應常用之催化劑可分為： 酸性催化劑-三氟化硼(Boron Trifluoride；BF3)、硫酸H2SO4 鹼性催化劑-甲基氧化鈉(Sodium Methoxide；NaOMe )、氫氧化四甲基銨鹽(Tetramethyl ammonium hydroxide，TMAH；(CH3)4NOH)。 本實驗使用TMAH為催化劑，其甲基化反應如下： 樣品不用處理即可注入嗎？ 樣品不用處理即可注入嗎？ 確定分析的目的 GC法合適嗎？ (ex：樣品是否能氣化) 選定儀器、檢點各個部份及按鈕的位置等 No Yes 考慮別的方法 No 做前處理 Yes 選擇適當管柱及裝好管柱 啟動記錄器、檢測器(使用氫氣、空氣時須做漏氣檢察) 設定、調整操作條件 讓carrier gas 流動，做漏氣檢查 注入樣品 紀錄(感度改變、登錄下來) 解讀分析 依規定的操作順序恢復成規定的狀態 結果良好 結果不佳