实验报告血液凝固及其影响因素.docVIP

实验五：血液凝固及其影响因素 实验人： 同组人： 【实验目的】 学习血液凝固的基本过程 了解加速或延缓血液凝固的一些因素 【实验原理】 血液凝固是一个酶的有限水解激活过程，在此过程中有多种凝血因子参与。根据凝血过程起动时激活因子来源不同，可将血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。内源性激活途径是指参与血液凝固的所有凝血因子在血浆中，外源性激活途径是指受损的组织中的组织因子进入血管后，与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。 【实验材料和用具】 家兔 清洁小试管7个、小烧杯2个、竹签、秒表、试管架、哺乳动物手术器械一套、兔手术台、动脉夹、塑料动脉插管、线、棉花、水浴槽、冰盒 液状石蜡、肝素、草酸钾1~2mg、脑匀浆液0.1ml、生理盐水 【实验过程】 动物麻醉及颈部手术 （此部由助教老师操作） 取一只动物，称重。按1g/kg体重的剂量将乌拉坦（氨基甲酸乙酯）由耳缘静脉缓慢注入，观察动物肌张力、呼吸与角膜反射的变化。动物麻醉后背位固定于兔手术台上。 剪去颈部手术野的毛，沿颈正中线在喉头上一指至锁骨上一指的地方作一5～7cm的皮肤切口。分离皮下组织及肌肉。 颈总动脉插管（此部由助教老师操作） 在气管两侧辨别并分离颈总动脉，颈总动脉下方穿两条线备用。在左侧颈总动脉的近心端夹一动脉夹，在动脉夹远心端距动脉夹约3cm处结扎。用小剪刀在结扎线的近侧（结扎线与动脉夹之间）沿向心方向剪一小斜口（约占管径的一半），向心脏方向插入动脉插管，由备用的线结扎固定。取血时将动脉夹松开即可。 血液凝固的加速和延缓观察 打开兔颈总动脉夹，血液从动脉插管流出，弃去第一份1mL动脉血后，向每个试管中注入1mL兔动脉血，并摇匀。 自血液流出动脉插管开始计时。除第1管外，其他各管每隔15秒钟将试管倾斜一次，观察液面是否倾斜即血液是否流动，直到试管内血液不再流动为止，记录凝血时间。 当第2管已经凝固时，再倾斜第1管看血液是否凝固，若尚未凝固则按上述方法每隔15秒钟倾斜一次，直到血液凝固为止，记录凝血时间，即为该兔血的凝固时间。 以第2管为对照，各管观察其他各管中血液凝固时间。 向第9管中滴加2％氯化钙2滴，观察血液是否凝固。 取出第5管中的玻棒，用水洗净，观察附着在玻棒上的纤维蛋白。 注意事项： 取放试管时要用拇指和食指捏住试管的上端，不要握住试管的底部，以免手的温度影响结果。 每支试管口径及采血量要尽量一致，不可相差太大。 记录凝血时间要准确。 判断凝血的标准要前后一致。一般以倾斜试管达45°时，试管内血液不见流动为准。 【实验结果及相关讨论】 管号 实验条件 凝血时间 （一组） 凝血时间 （二组） 现象解释 1 加入0.1％肝素溶液0.1mL（6滴） 大于20min 大于20min 肝素是抗凝剂，能不可逆的阻止血液凝固。由于肝素钠具有带强负电荷的理化特性，能干扰血凝过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，而增强后者对活化的Ⅱa、Ⅸa、Ⅹa、Ⅺa和Ⅻa凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活酶的形成；阻止凝血酶原变为凝血酶；抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。中和组织凝血活素（因子Ⅲ）。抑制血小板的聚集和释放。它对血中有机成分和无机成分的测定均无影响。 2 加入2％草酸钾溶液0.1mL （6滴） 大于20min 血液凝固的多个环节中都需要钙离子的参与，故通常用枸橼酸钠、草酸钠和草酸钾作为体外抗凝剂，它们可与钙离子结合而除去血浆中的钙离子，从而起到抗凝作用。理论上当继续向血液中加入CaCl2溶液，CaCl2中的钙离子会起到凝血因子IV的作用，从而使再次启动凝血过程，血液凝固。草酸盐是可逆性抗凝剂。但本次实验中加入CaCl2后并没有出现凝血现象，可能是CaCl2溶液配置有问题，或者由于操作不当，凝血因子已经完全失活。 3 室温（6滴生理盐水） 静置 7min30s 7min30s 血液流出血管后，很快会凝固。血液流出血管后血小板 4 室温（6滴生理盐水） 每隔15S倾斜45° 4min 5min 倾斜可加速血小板的粘附聚集过程，并加大血小板释放的凝血因子与血细胞的接触面积，从而加快了凝血的过程。该过程是内源性凝血过程。 5 细玻璃粉少许（6滴生理盐水） 2min45s 3min 玻璃粉是异物，可激活凝血因子Ⅶ及血小板，启动凝血过程。 6 脑组织浸出液（6滴） 15s 30s