放入Nfb培养基表面.ppt

Isolation and characterization of Azospirillum spp. 學生：林宗正、林俊宇 報告日期：2003.12.29 前言 固氮根瘤菌包括共生、協生及非共生固氮根瘤菌， 可以將空氣中的氮素固定為氨，轉變成作物可以利用的氮化合物，此作用是直接增加土壤的氮素來源，可用作微生物肥料，並能替代或減少化學氮肥的施用。 目前農業使用化學肥料過度，造成土壤中有益微生物欠缺， 無有效固氮之根瘤菌，氮素養分失調，單位面積產量下降 微生物肥料是指含有某種活微生物或酵素的固體或液體製劑，施用在種子、幼苗或土壤上， 可加強營養之有效性或增加土壤中營養份，補充土壤中有益微生物數量，使土壤維持在良好生態環境下發揮功能 目的 從植物根部分離出Azospirillum spp. ，並鑑定其特性 實驗架構 以Nfb medium進行培養 以BMS medium 進行培養 觀察菌落型態 進行生化測試 材料方法 1.在大度路邊取玉米、水稻、落花生三種 植物根部。 2.Nfb培養基的配製 Nfb medium(g/liter): L-malic acid, 5.0；K2HPO4, 0.5 MgSO4·7H2O, 0.2；NaCl, 0.1 CaCl2, 0.02 Trace element solution(NA2MoO4·2H2O, 0.2g ; MnSO4·H2O, 0.235g ; H3BO3, 0.28g ;CuSO4·5H2O, 0.008g ; ZnSO4·7H2O, 0.024g ; distilled water, 1000ml)2.0ml bromthymol blue(0.5% aqueous solution(dissolve in 0.2N KOH)) 2.0ml Fe EDTA(1.64% solution) 4.0ml Vitamin solution(biotin, 0.01g; pyridoxine, 0.02g; distilled water, 1000ml) 1.0ml KOH 4.0 PH adjusted to 6.8 with KOH 1.75g agar/liter 3.BMS培養基之配製 新鮮 potato去皮, 200g 煮沸30min in 1 liter,取濾液 L-malic acid, 2.5g KOH, 2.0g Raw cane sugar, 2.5g Vitamin solution (biotin,0.01g; pyridoxin,0.02g; distilled water,1000ml ),1.0ml Bromthymol blue(0.5% alcoholic solution), 2 drops Agar 15.0g 3.把根部切成數公厘的小段，放入Nfb 培養基 表面，在30℃下培養3天 4.在Nfb表面下1~2mm處，有一層白色物狀 產生 7.在NB medium上取單一粉紅色菌落,接置SIM medium上,進行移動性測試 結果 在Nfb medium上培養三天後，培養基上有些變化(綠→藍)，可明顯發現在培養基表面底下1~2mm處有一層白色薄膜產生，根據Bergy’s manual，可以推測此部分菌株為Azospirillum spp.因為此屬菌為微好氧性，生長在試管中靠近表面部分。 如圖九所示 圖九. 水稻、 玉米、 落花生根部在Nfb medium上經過培養三天之後的顏色變化及白色薄膜產生 在BMS medium上培養，培養初期的菌落型態。平板上出現為白色及黃色菌落，如下圖所