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不同低温冷冻预处理对异体神经移植再生 影响的实验研 【摘要】 目的 观察不同冷冻温度下保存的异体神经对周围神 经缺损修复的效果。方法 取96只同种属雄性大鼠，其中24只为取 材组，72只随机分为对照组（A、B组）和实验组（C、D、E、F 组），每组12只。A组为新鲜自体神经移植组,B组为新鲜异体神经 移植组,C、D、E和F组分别为经4°C、?50°C、?80°C和-196°C甘油 保存3周的神经移植组。术后2周，进行免疫组织化学观察；术后 9、16周进行大体观察、光镜检察、电生理测定。结果 术后2周， B组移植段见明显T淋巴细胞浸润，C、D、E组次之，A组及F组 未见T淋巴细胞。术后9周及16周，从神经再生效果评价看：A组 神经再生效果最好，F组次之，C、D、E组再次，B组最差。结论 在各冷冻组中，以-196°C组神经再生效果最好，接近新鲜自体神经 移植组。 【关键词】低温 神经移植周围神经 预处理 Abstract： Objective To investigate the regeneration of peripheral nerve allografts stored in the glycerol of different temperature.Methods A total of 96 male ined munohistochemistry to observe the infiltration of lymphocyte to the grafts and regeneration of sciatic nerve and fibe匚Nine and 16 ined icroscope.Results phocytes at the grafts in group B phocytes phocytes ent,grafts in group B e bete second,the next perature is -196 °C. Key ia;nerve allograft;peripheral nerve;pretreatment 周围神经缺损的修复，尤其是对长段神经干缺损的修复，其处 理仍为临床上较棘手的问题。自体神经移植被公认为是修复神经缺 损的最佳选择，但自体可供移植的神经有限、还会给供区带来功能 损害，临床应用受到一定的限制。如何找到一种或者几种合适方法 的联用，有效降低移植神经的免疫原性、增加神经纤维的再生能 力，将对临床上异体神经移植的常规开展起到积极的作用。目前效 果较为肯定的预处理方法是低温冷冻，而保存在怎样的冷冻条件下 效果最好，同样是我们所关注的。本研究的冃的是用甘油做保存 液，观察在不同冷冻温度下保存的异体神经对周围神经缺损修复的 效果，以探求出最佳的冷冻温度。 材料与方法 1动物与分组 健康同种属雄性Wistar大鼠96只，月龄2月以上，体重（300 ±20） go其中24只为取材组，72只随机分为对照组（A、B组） 和实验组（C、D、E、F组），每组12只。A组为新鲜自体神经移 植组,B组为新鲜异体神经移植组,C、D、E和F组分别为经4°C、? 50°C、?80°C和?196°C甘油保存3周的神经移植组。 2主要仪器及试剂 显微手术器械，冰箱（容声，广东），双冃显微镜（奥林巴斯， 口本），病理组织包埋台（BMZ III型，苏州），超薄切片机 （Rechert Ultracut E型，德国），电子显微镜（H?600,日本），肌电 检测仪（KEY point V 3.22, Medtronic,美国），小鼠抗大鼠CD4和 CD8单克隆抗体（英国Serotec公司），兔抗人GAG单抗（美国 SantaCruz公司），生物素标记的兔抗大鼠血清（美国Sigma公司）。 3方法 3.5%水合氯醛lml/100g腹腔麻醉。在大鼠股后外侧行纵行切 口；从梨状肌孔下0.5cm处，用消毒剃刀片，切取神经干l.Ocmo 取材组：取24只大鼠双侧坐骨神经干取下1.5cm长，本实验4组（4 X 12）神经，置于37°C条件下，依次浸泡于50%、70%和85%的甘油 中各3小时，再分装在盛有85%甘油EP管中密封，分别置于4°C、 -50°C -80°C冰箱与-196°C液氮瓶中（采用分阶段降温措施，降温速 度l~1.5°C/min）,保存时间均为3周。对照组A：将坐骨神经取 下后立即移植给自体的对侧；对照组B：将坐骨神经取下后不作任 何处理，立即相互交叉移植作为新鲜界体神经移植。实验组C、D、 E、F组：分别在3周后在随机原则下将各组12条神经分别移植给 12只大鼠。 4观察指标 大体观察；术后2周每组取2只大鼠做小鼠抗大鼠CD4和CD8 单克隆抗体双标免疫组化；术后9周及16周，每组随机抽取5只，