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中药材秦芜主要吸收成分群探究 ［摘要］该研究通过制备大鼠外翻肠囊模型，并对其 转运活性进行了确认，以秦芜中的马钱昔酸、当药苦昔、龙 胆苦昔、以及当药昔为检测指标，用HPLC对经肠囊主动转 运吸收后被吸收进入浆膜层的秦芜提取物中的主要成分群 进行了分析，探讨了中药材主要吸收成分群的研究方法。结 果表明所采用的大鼠外翻肠囊模型，在实验45 min内，组 织结构完整，转运活性良好；HPLC的专属性和线性关系良好, 精密度的RSD＞吸收成分群〉有效成分群的原则，中药材经 肠道消化，并通过小肠吸收后的成分群将会直接影响着中药 材的临床效果，因此，对于经口服方式发挥作用的中药来说, 其消化性是决定该中药临床疗效的前提和基础，而对该中药 经小肠吸收后的主要成分的定性、定量研究，是值得借鉴的 中药材有效成分研究和评价的方法。本研究采用大鼠外翻肠 囊（ 囊（everted gut sac, EGS）模型［1-2］,并对肠囊的转运 活性进行了确认；以中药材秦芜为研究对象，以其中的马钱 昔酸、当药苦昔、龙胆苦昔、和当药昔为监测指标，用HPLC 对秦芜提取物经空肠和回肠肠段主动转运吸收后，进入浆膜 层一侧样品中的主要成分进行了分析，指认了吸收成分群中 的部分主要成分。研究结果表明，大鼠外翻肠囊模型可以用 来作为中药材吸收成分群研究与评价的有效方法。 1材料 Wistar大鼠,雄性，体重（200±20） g,由北京维通利 华实验动物有限公司提供。合格证号SCXK-（京）2009-0017, 上述动物均以标准颗粒饲料饲养。 Agilentl260高效液相色谱系统（包括四元泵、柱温箱、 自动进样器、DAD检测器和Agilent ChemStation工作站， Agilent 公司）；Agilent6320 HPLC-MS 质谱仪（Agilent 公 司）；BF-2000氮吹仪，PSAN-8氮气发生器（北京中惠普分 析技术研究所）；混合氧气瓶（95%02, 5%C02）o 氯化钾，氯化钠，碳酸氢钠，磷酸二氢钠，葡萄糖，氯 化镁，氯化钙（分析纯，北京化学试剂公司），乙騰（色谱 纯，Dikma公司），甲醇（色谱纯，Dikma公司），纯净水（杭 州娃哈哈集团有限公司），乙酸（分析纯，北京化工厂）。 对照品龙胆苦昔（gentiopicroside, 110770-201013）、 当药昔（sweroside, 111742-200501 ）、马钱昔酸（loganic acid, 110770-201013）,由中国食品药品检定研究院提供。 当药苦昔（swertiamarian）,由成都普思生物科技有限公司 提供，纯度均大于98%。 秦芜 （QinJiao, Gen it ana Macrophy llae Radix, GMR） 药材，购自甘肃省天水，经上海中医药大学吴立宏副研究员 鉴定为 Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.的干燥根, 符合《中国药典》（2010年版）秦芜项下规定的内容。 2方法 1样品制备 2. 1. 1台氏液的制备 分别精密称取NaCl 8.0 g, KC1 0. 28 g, NaHC03 1.0 g, NaH2P04 0. 05 g, MgC12 0. 1 g, 溶于500 mL蒸馆水中，密闭冷藏；精密称取CaC12 0.2 g, 溶于500 mL蒸憎水中，密闭冷藏；临用前，在不断搅拌下, 将后者与前者均匀混合，加入葡萄糖1.0 g,调节pH 7.4 即得。 2. 1.2混合对照品溶液的制备分别精密取各对照品， 用甲醇制备成一系列不同浓度的混合对照品溶液，对每个浓 度的对照品，分别取200 PL混合溶液，加入200 uL台氏 液；振荡混匀后，用氮气吹干，加200 PL甲醇，超声溶解; 移取上清液，用0. 22 urn滤膜滤过，备用。混合对照品溶 液中，各对照品的质量浓度分别为马钱昔酸(8.78, 70.14, 175.4, 350. 7, 701.4 mg ? L-1)、当药苦昔(2.83, 5.66, 11. 32, 22. 64, 11. 32 mg - L-1).龙胆苦昔(10.01, 50. 05, 100. 1, 200.2, 2 002 mg ? L-1)、当药昔(2. 83, 5.66, 11.32, 22. 64, 56. 6 mg ? LT)。 2. 1.3供试样品的制备 将经氮气吹干后的供试样品， 用200 uL甲醇，超声5 min,溶解，移取上清液，用0. 22 um滤膜滤过，备用。 2.2大鼠外翻肠囊模型构建 2. 2.1大鼠外翻肠 囊制备于实验前Id,大鼠禁食不禁水，过夜。大鼠经氟烷 (halothane)麻醉后，实施剖腹手术，取出小肠，室温下, 用生理盐水(0. 9% sal