课件：细胞生物学的研究方法.pptVIP

● 3、贴壁培养（单层细胞培养） 分散的细胞悬浮在培养瓶中很快(就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁， 贴壁后的细胞形态形成多态性， 呈单层生长 单层培养的正常细胞保持接触抑制(contact inhibition)的特性 ● 4、悬浮培养 细胞在培养过程中不贴壁， 一直悬浮在培养液中生长， 如T细胞 5、细胞寿命 正常细胞培养的世代数有限 癌细胞和转化的细胞能无限生长 6、原代培养 （primary culture）：从动物机体取出的进行培养的细胞群。 原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖一定的代数后（一般10代以内）停止生长，需要从更换培养基。 7．细胞株（cell strain）：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群，能够繁殖50代左右，在培养过程中其特征始终保持。 8、细胞系： 原代培养的细胞经首次传代成功后即成细胞系（有的称10代之内的细胞为原代细胞） A :细胞系的生存期有限，称为有限细胞系 B:已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系 恶性的无限细胞系(癌化细胞)一般称为恶性转化细胞系 永生性而无恶性的细胞系，称无限细胞系或转化细胞系 三种培养 （二）植物细胞培养 1、组织培养：诱发产生愈伤组织，如果条件适宜，可培养出再生植株 根据植物细胞的全能性发展起来的利用植物植株的不同组织培养成完整植株方法 叶片、茎段、根等都可以通过诱导形成愈伤组织 2、悬浮细胞培养：在愈伤组织培养技术基础上发展起来的一种培养技术。适合于进行产业化大规模细胞培养，制取植物代谢产物 细胞工程 1、细胞融合： 通过培养和诱导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交（cell hybridization） 基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）； 来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。 2、诱导细胞融合的方法有三种： 生物方法（病毒） 化学方法（聚乙二醇PEG） 物理方法（电融合） 细胞融合 3、单克隆抗体 英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖 原理： 正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌抗体的能力，但不能在体外长期培养 瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌抗体。 将两种细胞杂交得到的融合体既有分泌抗体的能力，又有体外长期培养的特性 4、显微操作 显微操作术(micromanipulation) 在显微镜下， 用显微操作装置对细胞进行解剖手术和微量注射的技术 显微操作仪是在显微镜下对细胞进行显微操作的装置，可用于细胞核移植、基因注入、染色体微切和胚胎切割等手术 尼康NT-88NE显微操作/注射仪 显微操作仪 模式图 5、动物细胞核移植克隆技术 1997年，英国苏格兰罗斯林研究所I.WI.Wilmut等首次成功利用成年动物彻底分化的体细胞克隆出子代个体 I.Wilmut等从成年个体母羊的乳腺组织分离单个乳腺细胞，后与去核的羊的卵细胞融合，克隆得到一头绵羊Dolly“ 多利和邦妮 例子 克隆羊 供体细胞: 芬兰绵羊乳腺细胞 受体细胞: 苏格兰绵羊卵细胞 移核方法: 乳腺细胞与去核卵细 胞电融合 发育: 羊输卵管内发育之囊 移植: 植入假孕母羊子宫内 发年育成体 克隆技术的医学价值 1、治疗性克隆： 体细胞核移植----培育到囊胚期----从这个囊胚分离ES细胞----体外定向诱导分化成有特定功能的细胞,组织和器官 2、生殖性克隆：多个国家禁止 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 3、染色(staining)： ●目的: 给细胞的不同组分带上可区别的颜色特征 ●一些典型的有机染料 ●苏木精(hematoxylin): 能显示出细胞内核酸的分布 ●伊红(eosin):可使细胞质染色 ●苏丹染料(Sudan dyes)的乙醇饱和溶液:能使脂肪着色 4、有些过程需进行脱水处理 二、电子显微镜(electron microscope) 1、发明 1932年德国人Max Knolls和Ernst Ruska发明第一台电子显微镜 光学显微镜和电子显微镜下的细胞结构 2、电镜分类 透射电子显微镜(transmission electron microscope，TEM) 扫描电子显微镜(scanning electron microscopy，SEM) 光镜与透射电镜的结构 光学显微镜、TEM、SEM成像原理比较 3、透射电子