六月青多糖对酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用.docxVIP

六月青多糖对酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用 黄氏黄莎 黄建春 葛文漪 陈兆霓 黄仁彬(通讯作者)(广西医科大学药理 学教研室530021) 【摘要】目的：研究六月青多糖的提取工艺与六月青多糖对酒精(Alcohol)所 致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法：以酒精灌胃小鼠，建立急性酒精性肝损伤 模型，LYQPS灌胃给药，检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨 基转移酶(AST)活性以及肝组织中超氧化歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX)的活性与谷胱甘肽(GSH)的含量，观察光镜下肝组织的病理变化。结 果：LYQPS 降低 ALT, AST 的活性(Plt;0.01 或 Plt;0.05), LYQPS 降低 GSH 的含量 (Plt;0.01),升高GSH-PX, SOD的活性，能够减轻肝细胞损伤程度。结论：六月 青对酒精致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。 【关键词】六月青多糖 有效部位 急性肝损伤 酒精 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】 2095-1752 (2013) 11-0048-03 酒精性肝病(Alcoholic Hepatis)是由长期大量饮酒导致的肝脏疾病，是 我国常见的肝脏疾病之一，严重危害人民健康［1］。因此酒精性肝病的防治已成 为医学上的一个重要课题。木研究以56度白酒造模，以六月青多糖为治疗剂研 究六月青多糖对酒精急性肝损伤的保护作用。 1?材料 1丄药材：六月青采于广西灵山县，经广西中医药研究院赖茂祥研究员 鉴定。 动物：昆明小鼠，SPS级,雄性，体重(20plusmn;2) g,由广西医 科大学实验动物中心提供，实验动物牛产许可证：CKKG(桂)2003-0003,实验动 物使用许可证YKG(桂)2009-0002 o 13试齐I」：北京二锅头；丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST), 超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽（GSH）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH?PX）,试 剂盒均购自南京建成生物研究所。 1.4.仪器： Spactrumlab722 SP型分光光度计，上海精密科学有限公司；TDL?5A菲 恰尔离心机；不透钢电热恒温水浴锅；R-1001N型旋转蒸发仪；RE-5210型旋转 蒸发器；SHB?3循环水式多用真空干燥器。SHB循环水式真空泵;电热鼓风干燥箱 ZRD-5210;电热鼓风干燥箱101-1,真空干燥箱DZF-300;超纯水制造系统 CD-UPH-2-20L;数控超声波清洗器KQ-500DB; 方法 2丄六月青多糖的提取制备： 取干燥的六月青，加入8倍量热蒸惚水，浸泡过夜，80°C煎煮2小吋, 共煎煮3次。合并提取液，用旋转蒸发仪浓缩至每毫升提取液约为0.5g生药（即 0.5g生药/ml）。所得浓缩液加入六倍量无水乙醇，至4°C冰箱中静置过夜。次日 将提取液及沉淀以4000rpm,离心15min。离心后用布氏漏斗抽滤，取沉淀物。 所得沉淀物为六月青多糖。 2.2 ?动物分组及模型制备： 取昆明小鼠按体重随机分为5组，每组12只。正常对照组，洒精模型 组，联苯双酯组,（150mg/kg）, LYQPS高、低剂量组，各组剂量分为 2.5g/kg,0.625g/kgo每日上午把酒精模型组,联苯双酯组,LYQPS高，低剂量组 小鼠分别按10mg/kg剂量灌胃56度白酒一次，正常对照组给小鼠喂水和饲料, 每日下午把联苯双酯组,LYQPS高,低剂量组小鼠分别按10mg/kg分别灌胃给药, 模型组给予等体积生理盐水，连续10天，末次给药后，禁食不禁水，16h处死 小鼠，采血和肝组织样品，分离血清。 血精生化指标的测定： 摘除小鼠眼球取血，将凝固的血液于4000rpm, 4°C离心15分钟，分离 血清。按各试剂盒说明书的要求测定血清中的ALT, ASTo 肝组织生化的测定： 选取肝脏右叶用4°C生理盐水漂洗去除积血，滤纸拭净后称重，加适量 4°C生理盐水，制备10%肝匀浆，于4000rpm,4°C离心lOmin,去上清。肝组织蛋 白含量测定考马斯亮蓝法。分别按试剂盒说明测定SOD, GSH, GSH-PX水平。 2.5?统计学分析： 应用SPSS 16.0软件进行统计学处理，剂量资料均采用 表示，多组均 数比较采用方差分析，组间差异的显著性采用t检验。计数资料采用秩和检验， a=0.05为显著性检验水准。 26肝病理组织学检查： 小鼠取血后，腹部做环形切口，暴露门静脉及下腔静脉，用针头自门静 脉远端刺入约1.0cm左右，用4°C肝素化的生理盐水经肝门静脉冲洗肝脏，待肝 脏充盈变白后剪断下腔静脉。观察肝脏颜色并检查有无凝血，颜色均匀变淡，无 凝血者继续实验，持续冲洗人约3min至肝脏颜色渐白。在整个灌流的过程中， 间歇压迫下腔静脉使肝脏膨胀与冋