基因克隆的酶学基础2014.pptVIP

作用 催化除去 DNA 或 RNA 5‘ 磷酸的反应 用于防止 DNA 片段自身连接，或标记（5‘ 端）前除 DNA 或 RNA 5 磷酸 第四节? 其它酶 一、依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶 （DNA dependent RNA polymerase）???? SP6 噬菌体 RNA 聚合酶 （来源于感染鼠伤寒沙门氏菌 LT2 菌株） T4 或 T7 噬菌体 RNA 聚合酶 （来源于噬菌体感染的大肠杆菌）。 1．活性 ????这些 RNA 聚合酶实际上为转录中的 RNA 合成酶，识别 DNA 中各自特异的启动子序列，并沿此 dsDNA 模板起始 RNA 的合成。它与 DNA 聚合酶不同，无需引物，但需识别特异性位点。 2．用途????① 体外合成 RNA 分子。 ????② 用于表达外源基因。 二、核酸外切酶 （nuclease）? 单链外切核酸酶 大肠杆菌外切核酸酶I和VII：两头降解，产生2-25bp寡核苷酸片段 双链外切核酸酶 大肠杆菌外切核酸酶III:双链DNA从3‘OH末端开始降解，释放5’单核苷酸 从 dsDNA 3‘-OH 逐一去除单核苷酸的反应，底物为 dsDNA 或线状和带切口或缺口的环状 DNA ，反应结果是在 dsDNA 上产生长长的单链区。 该酶还有对无嘌呤 DNA 特异性内切核酸酶活性、 RNase H 活性