褪黑素对脊髓损伤大鼠GAP-43表达的影响.docVIP

褪黑素对脊髓损伤大鼠GAP-43表达的影响 徐玉生，金伟林，李星辰，马玉斐，曾冠楠，王培松 （450000 郑州，郑州大学第一附属医院骨科） [摘要] 目的 研究褪黑素(melatonin,MT)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后生长相关蛋白(growth associated protein 43,GAP-43)表达的影响，从新的角度探讨褪黑素修复脊髓损伤的机制。方法 72只SD大鼠应写明是大鼠T11～T12节段脊髓急性损伤模型建立后以分组说明答：后面的一句已说明A、B组建立T12水平脊髓损伤，C组为空白对照，不做处理。按照完全随机分组方法分为3组，每组24只：褪黑素治疗组（A组）、脊髓损伤组（B组）、空白对照组（C组）。A、B组以改良Allens法建立T11～T12水平脊髓损伤模型。A组于术后即刻腹腔注射褪黑素注射多少？即剂量。答：是按100mg/kg的剂量注射的，每只大鼠重量不一样，注射剂量也有微量差别。（按100 mg/kg剂量注射），B组腹腔注射等体积5%无水乙醇（MT溶剂），C组不做任何处理。术后1、3、7 d对各组大鼠进行BBB运动功能评分，检测血清中GAP-43的含量，并应用免疫组织化学染色法观察脊髓中GAP-43的表达。结果 术后1、3、7 d大鼠血清中GAP-43含量各组间比较有统计学意义（P0.05），其中褪黑素组最高，脊髓损伤组次之，对照组最低。免疫组织化学染色结果表明：褪黑素组脊髓切片中GAP-43染色阳性细胞数最多，脊髓损伤组次之，对照组最低，各组间比较有统计学意义（P0.05）。结论 褪黑素治疗后可改变脊髓损伤区局部的微环境,并提高血清和脊髓中GAP-43的含量，促进损伤脊髓的恢复。 应写明是大鼠T11～T12节段脊髓急性损伤模型建立后以分组说明 答：后面的一句已说明A、B组建立T12水平脊髓损伤，C组为空白对照，不做处理。 注射多少？即剂量。 答：是按100mg/kg的剂量注射的，每只大鼠重量不一样，注射剂量也有微量差别。 [关键词] 褪黑素；脊髓损伤；生长相关蛋白 [中图法分类号] [文献标志码] A [基金项目] 郑州大学研究生科学研究项目（11Y03314） [通信作者] 徐玉生，E-mail： jinlin924@126.com 脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)可导致患者损伤节段以下感觉和运动功能的丧失，给家庭及社会带来沉重负担，其治疗一直是医学研究的热点。生长相关蛋白(growth associated protein 43,GAP-43)是一种与神经细胞发育及再生相关的酸性膜磷脂蛋白，可引导轴突生长并调节新突触形成而促进损伤神经的修复,是公认的神经元再生和可塑性的分子标志物 ADDIN NE.Ref.{9A7FEF7F-3DC9-463F-8406-4EDC821A076C}[1]。褪黑素是由松果体产生的一种胺类激素，研究表明其可通过清除自由基、抑制脂质过氧化反应、减轻细胞损伤和凋亡、减轻中性粒细胞介导的毒性损害 ADDIN NE.Ref.{768CB7C7-ED4C-4491-AB74346}[2-3]等机制修复脊髓损伤，但其是否可通过提高GAP-43的含量以修复脊髓损伤目前尚少见报道。本实验旨在通过检测血清中GAP-43的含量和脊髓中GAP-43的表达，进一步明确褪黑素治疗脊髓损伤的机制，为临床用药提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 材料 成年雌性SD大鼠72只，体质量（250±30）g，购自河南省实验动物中心,许可证号：SCXK（豫）2010-0002。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。褪黑素（美国SIGMA公司），大鼠GAP-43酶联免疫分析（ELISA）试剂盒购自美国RD公司，兔抗鼠GAP-43抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，DAB试剂盒、SP9002免疫组化试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。 1.2 试验方法 1.2.1 动物模型的建立和分组 按300 mg/kg腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，麻醉后固定。取后正中切口，暴露脊髓硬膜，改良Allen’s WD法制备大鼠T11～T12节段脊髓急性损伤模型 ADDIN NE.Ref.{9A7FEF7F-3DC9-463F-8406-4EDC821A076C}[4]。造模成功标准：撞击硬膜后大鼠双下肢呈回缩性扑动、鼠尾痉挛性摆动、硬膜表面充血水肿。术毕生理盐水冲洗术野，再次消毒后常规缝合。72只SD大鼠按照完全随机分组方法补充具体的随机方法答：已补充，按照完全随机分组方法分为褪黑素治疗组（A组）、脊髓损伤组（B组）、空白对照组（C组），每组24只。A组造模成功后10 min腹