玻璃化冷冻技术在人卵裂期胚胎冷冻保存中的应用结局分析.docVIP

玻璃化冷冻技术在人卵裂期胚胎冷冻保存中的应用结局分析 蒋晓明，沙爱国，周友泉，李萍，那旭红，纪红，邓星（361003厦门，解放军第174医院生殖医学中心） 低温冷冻保存技术是人类辅助生殖技术的重要组成部分，胚胎冷冻技术的应用大大提高了临床治疗的效率、丰富了临床治疗方案[1,2]。目前主要应用的是胚胎冷冻技术包括程序冷冻和玻璃化冷冻。程序冷冻技术已相对成熟和稳定并已得到广泛应用，而玻璃化冷冻技术作为一项新技术备受关注。我们对本中心开展的人卵裂期胚胎玻璃化冻融-胚胎移植后的治疗结局进行了回顾性分析。 1 材料与方法 1.1 研究对象及分组 选择本中心2008年12月至2009年10月接受胚胎玻璃化冻融-胚胎移植的全部199个周期作为实验组， 2008年1月至2008年12月接受胚胎程序冻融-胚胎移植的全部215个周期及2008年1月至2009年10月实施的全部974个体外受精/单精子卵胞浆内注射－胚胎移植（in-vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection-embryo transfer, IVF/ICSI-ET）周期作为对照组。所有冷冻、移植胚胎为第3天卵裂期胚胎。 1.2 胚胎玻璃化冷冻保存及复苏[3] 1.2.1 冷冻保存液的配制 冷冻平衡液：羟乙基哌嗪乙磺酸 (HEPES)缓冲的合成人输卵管液（m-HTF）中添加7.5％乙二醇（EG）+7.5％二甲基亚酚（DMSO）+20％血清蛋白替代物（SPS）；冷冻液：m-HTF中添加15％EG+15％DMSO+20％SPS＋0.5 mol/L蔗糖。 1.2.2 复苏液的配制 复苏液Ⅰ：m-HTF中添加20％SPS；复苏液Ⅱ：m-HTF中添加20%SPS+1 mol/L蔗糖；复苏液Ⅲ：m-HTF中添加20%SPS+0.25 mol/L蔗糖；复苏液Ⅳ：m-HTF中添加20%SPS+0.125 mol/L蔗糖。 1.2.3 玻璃化冷冻 室温下，胚胎在平衡液中停留4min后移入冷冻液，20 s内装载并直接投入液氮保存。胚胎冷冻载体使用自制的塑料麦管片。 1.2.4胚胎复苏 37℃下，直接将冷冻胚胎的麦管片插入复苏液Ⅱ，让胚胎滑落到培养液中，停留5 min。室温下，将胚胎依次移入复苏液Ⅲ、复苏液Ⅳ分别停留2~3 min、1~2 min ；37℃下，用复苏液 1.2.5胚胎冻融后存活标准 复苏后存活的卵裂球数目超过冷冻前卵裂球数目的50%判定为胚胎存活。 1.3内膜准备及黄体支持 1.3.1内膜准备 平素月经周期规则，自然周期卵泡发育正常者，月经来潮第9天左右开始进行B超下排卵监测，优势卵泡发育至直径11~13 mm开始配合尿LH检测，尿LH试纸出现双线时抽血查LH值。多数患者在出现LH峰后第2天排卵，排卵后第3天移植；不排卵者选择LH峰后第4天移植。平素月经周期不规则，自然周期卵泡发育不良者。月经来潮第1天开始口服补佳乐（4 mg/d起始，如内膜薄，可增量至8 mg/d）第9天左右开始进行B超监测内膜厚度，内膜发育至 7 mm（少数患者 1.3.2黄体支持 选择自然周期内膜，于排卵后每天肌注黄体酮40 mg。激素替代周期者，在内膜达到标准当天肌注黄体酮60 mg，以后每天肌注黄体酮100 mg。 1.3.4 统计学方法 采用统计软件SPSS 16.0行χ2检验和t检验。 2 结果 2.1 玻璃化冻融与程序冻融胚胎移植助孕结局比较 与传统程序冻融比较，经玻璃化冻融的胚胎复苏后存活率显著增高（P0.01），移植取消率显著降低(P0.05)；在平均ET数没有差异的情况下(P0.05)，玻璃化冻融-胚胎移植的移植周期妊娠率（P0.05）、胚胎种植率都显著高于程序冻融 (P0.01)。见表1。 表1 玻璃化冻融胚胎移植与程序冻融胚胎移植助孕结局的比较 复苏存活率（％） 移植取消率（％） 平均ET数（个） 妊娠率（％） 种植率（％） 程序 76.07(499/656) 7.44(16/215) 2.11（419/199） 27.14(54/199) 15.27(64/419) 玻璃化 90.93（471/518b 2.51(5/199)a 2.21(428/194) 39.69(77/194)a 23.6(101/428)b a：P0.05，b：P0.01,与程序冻融比较 2.2玻璃化冻融与IVF/ICSI新鲜周期胚胎移植结局比较 玻璃化冻融-胚胎移植后移植周期妊娠率达到了与新鲜周期移植相似的水平，种植率也接近新鲜周期移植的水平(P0.05)。见表2。 表2 玻璃化冻融胚胎移植结局与IVF/ICSI新鲜周期胚胎移植结局的比较 平均ET数（个） 妊娠率（%） 种植率（%） 玻璃化冷冻复苏周期 2.21(428/194) 39