麻疹减毒活疫苗联合顺铂抗卵巢癌细胞体外实验研究.docVIP

麻疹减毒活疫苗联合顺铂抗卵巢癌细胞体外实验研究 刘 婷，孙丽君 （563000 贵州 遵义，遵义医学院附属医院妇产科） ［[关键词］ 麻疹减毒活疫苗；顺铂；卵巢癌细胞；细胞凋亡 [中图法分类号] [文献标志码] B [通信作者] 孙丽君，电话：（0852）8608782,E-mail：shunlj666@ 卵巢癌是女性生殖器三3大恶性肿瘤之一，治疗上多采用手术辅以化疗的综合治疗，但疗效欠佳[1]。近年来，生物治疗作为肿瘤治疗的一一种新型模式日益受到重视。病毒治疗属于生物治疗中的一一种。我们以体外原代培养的卵巢癌细胞为研究对象，探讨麻疹减毒活疫苗（MV）在体外对卵巢癌细胞的杀伤作用及联用顺铂（DDP）时两者是否产生协同效应。 1 1 材料材料与方法 1.1 卵巢癌细胞标本 取自2007年3月至2007年10月在本院手术治疗的5例未经化疗卵巢癌患者，均为病理检查确诊，属上皮性卵巢恶性肿瘤。 1.2 方法 1.2.1 1 卵巢癌细胞的培养 用含20%胎牛血清、青霉素100U/ml、链霉素100 U/ml的RPMI1640培养液，置于37℃，5 % CO2 1.2.2 2 卵巢癌细胞的鉴定 进行细胞爬片后送本院病理科行HE染色及免疫组化表型CK7的测定。 1.2.3 3 MTT法检测细胞增殖抑制情况 将细胞接种于96孔板中，培养24 h，按实验设计加入药物干预，每组设3个复孔，并设对照组和空白组。单用MV（北京晶美公司产品）时选取1：︰40、1：︰30、1：︰20、1：︰10、1：︰1稀释倍数；联合用时选取：DDP（山东德药制药有限公司产品）浓度0.6、3.0、15μg/ml[2]，MV稀释倍数1：︰20、1：︰10、1：︰1，以上浓度依次组合；给药72 h后，每孔加入MTT液20μl，继续培养4 h，弃去培养液，每孔加入DMSO 150μl，使结晶物充分溶解，酶联免疫检测仪在570nm波长下检测每孔的光密度值[D(570)]，相同药物设计组重复3板。计算抑制率[3]：细胞生长抑制率＝[1－实验组平均D(570)]/对照组平均D(570)×100%；联用时计算2种干预因素的相互作用：q=E(AB)／[EA＋(1－EA)×EB]，E(AB)为2种干预因素合用的抑制率，EA和EB为各干预因素单用的抑制率，q＞1.15表示2种干预因素作用协同，q＝0.85～1.15表示2种干预因素作用相加，q＜0.85表示2种干预因素相互拮抗[4]。 1.2.4 4 流式细胞仪测定细胞的凋亡率 将细胞接种于24孔板中，培养24 h，按实验设计加入药物干扰，每组设3个复孔，并设对照组和空白组。DDP浓度选取血药峰值浓度3.0μg/ml，MV选取1：︰1、1：︰10、1：︰20稀释倍数，合用时依次组合。给药后24 h收集细胞，采用AnnexinⅤ/PI双染法，遵照BD试剂盒说明书方法进行标记，然后上流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 1.3 3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件，计量资料以x±s表示，行单因素方差分析。 2 2 结 果 2.1 1 卵巢癌细胞的鉴定及形态观察 在倒置显微镜下，可见癌细胞呈铺路石样紧密排列，形态不规则，可见核分裂象。HE染色：细胞形态不规则，呈多角形，核增大且深染，可见多核巨细胞；免疫组化表型CK7的测定：卵巢癌细胞CK7阳性产物表达于细胞质，呈棕黄色。 2.2 2 MV感染后细胞形态观察 MV感染卵巢癌细胞24 h后，癌细胞收缩变圆，部分细胞相互融合；感染72 h后，部分细胞相互融合形成多核巨细胞，细胞内出现空泡，融合后的细胞周围呈空白区（图1）。 图 1 1 MV感染卵巢癌细胞72 h后形态学观察（倒置相差显微镜 ×10） 2.3 3 MTT法检测结果 2.3.1 1 MV对卵巢癌细胞增殖抑制的影响 单用MV作用于卵巢癌细胞72 h后，卵巢癌细胞的生长均受到不同程度的抑制。1：︰40、1：︰30、1：︰20、1：︰10、1：︰1的抑制率分别为（9.84±1.06）%%、（13.50±2.01）%%、（17.81±1.80）%%、（26.02±3.15）%%、（50.12±3.59）%%，其抑制率随着MV稀释度的降低而增高，在所给稀释度范围内存在良好的量效依赖关系。 2.3.2 2 DDP与MV联用对卵巢癌细胞增殖抑制的影响 当两者联用时，与单用DDP或MV相比能显著抑制卵巢癌细胞的增殖（P＜0.05）；在同一DDP浓度下，两者联用时的增殖抑制率随MV稀释倍数的降低而增加。当DDP浓