二甲双胍一对her2阳性胃癌细胞的增殖抑制作用及其机制研究-肿瘤学专业毕业论文.docxVIP

参考文献 参考文献 25 p忖录 ．．28 致谢 ．．29 文献综述 ．30 作者简历 35 万方数据 中文摘要目的：1)探讨二甲双胍对HER2阳性胃癌细胞增殖、克隆形成、凋亡、细胞周期 中文摘要 目的：1)探讨二甲双胍对HER2阳性胃癌细胞增殖、克隆形成、凋亡、细胞周期 的影响；2)探讨二甲双胍抑制HER2阳性胃癌细胞增殖的作用机制；3)探讨二甲双胍 与靶向药物曲妥珠单抗联合的协调作用。 方法：1)Western blot、qRT．PCR检测常见胃癌细胞系中HER2蛋白表达水平；2)取 对数生长期的HER2阳性胃癌细胞NCI-N87、OEl9接种于细胞培养板中：加入不同浓 度的二甲双胍(10 mmol／L、20 mmol／L、30 mmol／L、40 mmol／L、50 mmol／L)分别干预24 h、48 h、72 h，用等量DMEM培养基处理作为对照组，CCK．8检测二甲双胍对HER2 阳性胃癌细胞NCI．N87、OEl9增殖的影响：结晶紫染色法检N-甲双胍对HER2阳性 胃癌细胞NCI．N87、OEl9的克隆形成能力的影响；流式细胞仪检N-甲双胍对HER2 阳性胃癌细胞NCI-N87、OEl9的凋亡、周期阻滞情况：Western blot检测二甲双胍对 HER2阳性胃癌细胞NCI-N87、OEl9的HER2蛋白表达水平及P13刚Akt／mTOR信号通 路的影响：3)CCK．8检测曲妥珠单抗联合二甲双胍对HER2阳性胃癌细胞NCI-N87、 OEl9增殖的影响。 结果： (一)二甲双胍对HER2阳性胃癌细胞的影响： 1)Western blot、qRT．PCR检测NCI．N87、OEl9、AGS、MGC-803、BGC一823、 MKN．45以及SGC．7901等七种常见的胃癌细胞株中HER2蛋白表达水平，HER2蛋白 在NCI．N87、OEl9细胞中呈高表达，在MGC一803、MKN．45细胞中呈弱表达，在AGS、 BGC．823、SGC．7901细胞中不表达。 2)CCK．8检测10、20、30、40、50 mmol／L的二甲双胍干预HER2阳性胃癌细胞 NCI．N87 24 h后细胞相对增殖率分别为1．391-+-0．070、1．2894-0．044、1．1 99±O．01 7、0．978 ±0．052、0．9524-0．041，干预48 h后细胞相对增殖率分别是1．779±0．069、1．593±0．236、 1．385±0．158、1．142±0．082、0．789±0．055，干预72 h后细胞相对增殖率分别是2．511 -4-0．1 18、1．882±0．090、1．528±0．067、0．898±0．041、0．499±0．019，与空白组对比，差 异有统计学意义(p0．05)；CCK．8检测相同浓度梯度的二甲双胍干预HER2阳性胃癌细 胞OEl9 24 h后细胞相对增殖率分别为1．8244-0．027、1．738-+-0．010、1．443±0．025、1．237 IV 万方数据 ±0．041、0．932±0．01 ±0．041、0．932±0．01 1，干预48 h后细胞相对增殖率分别是2．3594-0．041、2．010±O．033、 1．462±0．029、1．103±0．018、0．723±0．021，干预72 h后细胞相对增殖率分别是3．704 ±0．083、3．033±0．037、1．658±0．027、0．860±0．032、0．316±0．009，24 h时间点中10、 20 mmol／L二甲双胍处理组无统计学差异(PO．05)，其余同时间点各药物浓度组胃癌 细胞的增殖下降率具有统计学差异(P0．05)。 3)结晶紫染色法检测10、20、30、40、50 mmol／L的二甲双胍干预NCI．N87克 隆形成能力，其中10、20、30 mmol／L组克隆形成率分别为72．500％±3．546％、25．000％ ±7．071％、6．500％±2．121％，与空白组相对比，差异有统计学意义(p0．05)，40、50 mmol／L组未见明显细胞克隆形成：结晶紫染色法检测相同浓度梯度的二甲双胍干预 OEl9克隆形成能力，其中10、20 mmol／L组克隆形成率分别为57．500％±10．607％、 17．500％4-3．536％，与空白组相对比，差异有统计学意义(p0．05)，30、40、50 mmol／L 组未见明显细胞克隆形成。 4)流式细胞仪检测10、20、30、40、50 mmol／L的二甲双胍干预NCI-N87 48 h后 细胞凋亡率分别为5．450％±0．574％、9．250％±1．630％、9．850％4-O．759％、17．900％±