第三章 培养基及其配制.pptVIP

本章的教学目标 熟悉培养基的组成成分及其作用 了解培养基的基本类型及其特点 掌握培养基的配制、保存方法。 本章的主要内容 培养基的成分 一、培养基的主要成分 无机营养成分 有机营养成分 植物生长调节物质 附加物和天然的有机添加物质 琼脂 pH值 （一）无机营养成分 无机营养又叫矿质营养，指植物在生长发育时所需要的各种维持其正常生理活动的化学元素。 主要有： 大量元素： 微量元素： 1.大量元素： 2.微量元素： （二）有机营养成分 碳源 维生素 肌醇（环己六醇） 氨基酸 1、碳源 种类： 最常用：蔗糖 葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。 作用： 糖作为碳源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架 为细胞的呼吸代谢提供底物与能源 同时维持一定的渗透势，并且能够维持一定的渗透压（一般在1.5～4.1×10５Pa）。 浓度：在2%—3%，常用3%。高压灭菌时，一部分糖会发生分解，制定配方时要给予考虑。 在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。 2、维生素 3、肌醇（环己六醇） 作用： 在糖类的相互转化中起重要作用。 适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。 对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。 使用浓度一般为l00mg／L 4、氨基酸 （三）、植物生长调节物质 1、生长素类(auxin)： 作用：主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。 浓度：0.05－5mg／L。 种类： IAA：天然存在的生长素，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小、，高温高压易被破坏，也易被细胞中的1AA分解酶降解，受光也易分解。 NAA：耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。 IBA：促进发根能力较强的生长调节物质。NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。 2，4—D：起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。 强弱顺顺序为：2,4-D＞NAA＞IBA＞IAA 溶于95％酒精或0.1mol/L的NaOH 2、细胞分裂素类 两种激素配比模式 3、GA (赤霉素)： 4、生长抑制剂类 作用： 适当种类和数量的生长抑制剂能调节内源和外源的植物激素，是他们所处的相互关系恰好能产生我们所希望的变化。 种类： ABA 三碘苯甲酸：可以促进秋海棠叶片形成芽（Heide,1971）。 矮壮素 比久（B9） 根皮苷：在培养基中加入适当的根皮苷可提高莲叶秋海棠、雪松和月季的分化出苗效率（李洲，1983）用量为1~7mg/L。 间苯三酚 （四）附加物和天然的有机添加物质 天然的有机添加物质 附加物 活性炭、Vc等 抗生物质 1、天然的有机附加物： 2.活性炭 3.抗生物质 （五）、琼脂 （六）pH 培养的植物材料大多数要求弱酸性的环境 一般应将培养基的pH值用1mol/L的K0H或NaOH调整到pH 5.6～5.8的范围内，有时调到pH 6.0 少数喜酸性的植物有用到pH5.4，甚至pH 4.6的。 二、培养基的类型及特点 （一）培养基的类型 基本培养基（根据培养基中无机盐含量的不同 ） 含盐量高的培养基如: MS, LS, BL, BM, ER 硝酸钾含量高的培养基 如: B5, N6, SH 中等无机盐含量培养基 如: H, Nitsch, Miller 低无机盐培养基 如: White, WS, HB 应用培养基 诱导培养基，又称脱分化培养基。用作外植体诱导发生愈伤组织的培养基 继代培养基：诱导出的愈伤组织需用一种培养基让它继续不断地生长下去。 分化培养基：用于从愈伤组织诱导形成小苗（幼芽或胚状体）的，称为。 生根培养基:为诱导再生小苗生根的培养基称为。 （二）几种常用培养基的特点 MS培养基:1962年穆拉希吉（Muyashioge，T.）和斯科克（Skoog，F.）为培养烟草细胞而设计的。 White培养基（1963）,又称 WH培养基：怀特（white）1941年为培养番茄根尖设计的，1963年又作了改良。 N6培养基（朱至清1974）：为水稻花药培养而设计的。 B5培养基(1968)：甘博格（Gamborg）等1968年为培养大豆根细胞而设计的 。 2、White培养基（1963）又称 WH培养基 是1943年由White设计的，1963年做了改良。 特点：无机盐浓度较低。 它的使用也很广泛，无论是生根培养还是胚胎培养或一般组织培养都有很好的效果。 3．N6培养基（朱至清1974） 4 、B5培养基 特点： 含有较低的铵盐；较高的硝酸盐和盐酸硫胺素铵盐。 可能对不少培养物的生长有抑制作用。 但它适合于有些植物如双子