钙调素cam和auxiaa基因克隆及其在梨 次柑橘子房幼果和体细胞胚胎发生中的表达研究.docx

／Y／ll／I／11／／I／／／8ll／／I／11／／／I／2I／／I／1611／／／15／Hllf6／／／ll／华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 ／Y／ll／I／11／／I／／／8ll／／I／11／／／I／2I／／I／1611／／／15／Hllf6／／／ll／ 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是 如需保密，解密时间 2008年12月3 1日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究Z-作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一R-r_作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意． 研究生签名：j蟊均匀k 时间：≯印1年占月Z22．-日 学位论文使用授权书 本人完全了解“华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定”，即学生必须按 照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电 子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、K- 编学位论文．本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论 文的全部或部分内容． 注：保密学位论文在解密后适用于本授权书． 学位论文作者签名：鬼觋救导师签名：劣1仔午 签名日期：加]年6月丑日 签名日期： 籼7年易月肋日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 目 目 录 摘 要 ．I Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．III 缩略词表 ．．Ⅵ 第一章问题提出与研究进展 1 1．1课题的提出 1 1．2文献综述 ．2 1．2．1果实钙营养生理研究进展 ．．2 1．2．1．1根系对钙的吸收与运输 ．3 1．2．1．2果实对钙的吸收、运输与分布特性及其影响因素 ．3 l。2．1．2．1果实对钙的吸收、运输与分布特性 3 1．2．1．2．2影响果实对钙的吸收、运输与分布的因素 5 1．2．1．3果实细胞水平上Ca2+的吸收、运输与分布规律 ．．6 1．2．1．4果实钙的生理功能 ．7 1．2．1．5钙与果实生理失调及其矫正 8 1．2．2钙调素(CaM)的研究进展 9 1．2．2．1植物CaM的基本结构 。10 1．2．2．2钙调素蛋白亚型 ．1 0 1．2．2．3 CaM的基因表达 1l 1．2．2．4 CaM生理功能的研究 ．1 1 1．2．3生长素信号转导研究进展 。12 1．2．3．1生长素调节基因的表达 。13 1．2．3．1．1 SAUR ．1 3 1．2．3．1．2 GH3 ．1 3 1．2．：；．1．3 Aux／IAA ．． ． ．． ．． ．． ．． ．． ．．． ．．．．．． ． ．．．． ． ．．13 1．2．3．2 Aux／IAA基因的表达特点 。14 1．2．3．3 Aux／IAA基因结构特点及其功能 ．14 1．2．3．4A AA蛋白和ARF调节生长素反应基因表达的可能机制 14 1．2．3．4．1 ARF介导的生长素诱导基因表达的改变 。14 1．2．3．4．2 Aux／IAA蛋白阻遏ARF的功能 l 5 1．2．4原位杂交技术概述 ．1 5 1．2．4．1 RNA原位杂交的基本原理 16 1．2．4．2 RNA原位杂交在植物基因表达研究中的应用 ．16 1．2．4．2．1基因表达定位 1 6 1．2．4．2．3分离基因的功能分析 ．17 1．2．4．2．4基因家族的功能差异分析 17 1．2．4．2．5外源基因在转基因植物中的表达定位 。18 1．2．4．2．6外源刺激引起的基因表达定位 。18 1．3本研究的目的和内容 18 第二章钙调素基因的克隆及分析 第二章钙调素基因的克隆及分析 19 2．1前言 ．．19 2．2材料与方法 。19 2．2．1材料 ．1 9 2．2．2菌株、质粒及试剂 。19 2．2．3 RNA的提取 ．20 2．2．3．1玻璃和塑料制品的处理 ．20 2．2．3．2溶液的配制 20 2．2．3．3 RNA提取步骤 。20 2．2．4 cDNA合成 。2l 2．2．5 DNA的提取 21 2．2．6基因克隆 22 2．2．6．1引物设计 22 2．2．6．2 PCR扩增 。22 2．2．6．3目的片段的回收 ．23 2．2．6．4 TA克隆 23 2．2．6．5质粒提取 ．24 2．2．6．6 PCR检测及序列测