肝癌癌基因p28gank及其新家族成员p28流-ⅱ的克隆 鉴定与功能研究.docx

麓三星瓢鑫室勰QQ强健圭垒艟豫塞基建黧蛭星委英文绩略谰表 麓三星瓢鑫室勰QQ强健圭垒艟豫塞基建黧蛭星委 英文绩略谰表 HCC HepatoeeUular Carcinoma 麟纲腿瞧翳瘿 ICe Intrahepatic Cholangiocareinoma 肝内胆管细胞瘸 MHC Metastatic hepatic carcinoma 转移性脬癌 NlS 竣兔疫菠应评分 CICS Chinese ImmunoReactive Counting Scores 中国免疫反应计数 评分 鞲孓nest-PCR l*everse—transcription nest-polymerase 逆转录鬃茂粥疑 chain reaction ANK aracyrm repeat domain Amcyrin震复序列 IpTG 异嚣基骧代．§-D．半 乳糖营 D嚣Pe Diethyl pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 DTT Dithiothreitol 二虢苏糖醇 MOpS 3一(辩璃辩代)稀磺酸 EDl：A Ethylene diamineteraaeetic acid 2-二胺熙乙酸 NLS Nuclear location蠡耐 核定位镕譬 NES Nuclear export signal 出援债号 R8D Rbl binding domain R§l疆鑫缝合鬣焘 筮三墨医盘缴2Q塑缴遐±望些鲶塞 筮三墨医盘缴2Q塑缴遐±望些鲶塞 夔墓燕銎 中文摘要 肝细胞性肝癌(简称肝癌。Hepatocellular Carcinoma，HCC)是我国最常见 夔藤发艟癌之一，焚发生发震是壹体肉多蒸嚣参与、多步骤貉圈静炭杂遘稷。嚣 前，尽管已缀鉴定了一些肝癌的抑瘸基因，如p53和p』6_舢洲，并明确了它们在肝 薅审鹣特舅牲失滔，毽是袭瓤癌发囊串特异缝激活麴瘗基戳熹|】少觅鞭道。芦嚣矗糍 是新近克隆的一个农肝癌中高表达的癌基因，其致瘢性可能舄p280AN‘蛋白通过 离磷酸纯并阵解摔瘸蛋自gbl，促使细施自Gl期商S期转化有关。gbl与E2F 转蒙因子榍结合共阕调控下游基因的表达；选些基因的开放与细胞的增殪分裂有 关。gbl-E2F转录复合物的功能受剿CDK4．CyclinDl．p16制K48信号通路的调控。 本缀与国强安验室鲍研究郡谖骥，p2sGANK鼍缨熬羼麓激酶CDK4提缝会，撼零其 在CDK4．CyclinDl-p16删“气_Rbl．E2F信号转蹲通路中的调节作用。 零辑褒罄在逶避应霭Northem Blot及受疫缀缓纯学接拳捡灏懿艿积麟基溺在天 肝癌组织中的表达水平与I|笛床病理指标间的关联，确定p28溯胖基因在肝癌发生发 震遥程孛静作蘑。邋过基禹转染、免疫荧光染色、细胞生物攀行为检测和裸鬣荷瘤 等实验技术，研究p280^N‘溅自在细胞内的定位及对于细胞生长能力的影响。应用 逆转录．巢式PCR技术寻我p2妒4孵基因在肝癌内的新家族成员，并应用RT-PCR 方法检测簸发现基阂在人翳瘪组织中的表达零平。避过免疫共沉淀、GSTpull．down 等技术研究p28GANK和p28．H与抑癌灏白Rbl及细胞周期激酶CDK4间的相互作用， 探讨贮s6ANK窥癣g．嚣在Rbl．CDK4-CyclinDl-p16科期‘篷号转导逶爨孛熬露瓣。 Northern blot杂交显示，辟船副删基因在人脑组织中高表选，较弱表达于肺、脾、 嚣黎瓿霰心飘，不表达予舞、获、黉、，l、瑟秘大酝等游纯遂缀织。崧醴铡入艇癌 组织中，p2艿删眦基暇mRNA的检出率为96，9％(62／64)，其中癌较瘀旁组织表达 瞬显升高静蠢91．9％(57／62，2．708士1．418，P0．001)。商门脉癌柱形成的肝癌 p28Ga眦基因的表达摄著离子无癌栓的腮癌(p=0．021)。脾瘤组织内窍静脉馒滤的 肝癌p28酬脯基因韵表达明鼹高于无静脉侵润的肝癌(p=0．047)。束发现p2∥觥 载表达舞裹譬乙翳襄毒感染、矗漶AFP求乎、翳疆像、瓣攘大，l、及翳癌分缀等其 它临床病理指标之间有明显的相关性。 疱爱蠡磐摹《备弱兔获天蝣86媸‘撬薄行瓣癌及霪莘耱警癌缀缓留学豹免疫缀纯结 果显示．p280AN‘特异性高表达于恶性肝上皮细胞，不表达于良恶性胆管上皮细胞、 筮三攀医去燮2Q盟级燧±望些浚塞藏震蕴要血管内皮细胞、Kuffer氏细胞及肝问质细胞。对肝癌组织的兔疫组化染色评分与临 筮三攀医去燮2Q盟级燧±望些浚塞藏震蕴要 血管内皮细胞、Kuffer氏细胞及肝问质细胞。对肝癌组织的兔疫组化染色评分与临 床瘸理资拳章程关联，发现p28GAN＆在嚣手癌内静过表述与瓣瘤大小鬃正穗关(p= o．009)，与赢清HBs抗原感染呈受相关(卢=0．001)，与Edmonson分级凰负相 关。26例入肝癌缀