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* 抗菌药物的敏感性试验 主要内容 抗菌药物的敏感性试验 （定义、目的、方法） 如何报告药敏试验结果 什么是抗菌药物的敏感性试验？ 测定抗菌药物在体外抑制病原微生 物生长的效力，称抗菌药物对细菌的抑 　菌试验，或称细菌对药物的敏感性试 　验。 为什么要做药物敏感性试验？ ? 供临床医师选用抗菌药物时的参考 ? 细菌耐药性监测和耐药性变迁 ? 评价新抗菌药物的药效学特征 ? 对细菌耐药谱分析和分型有助于某些菌种 的鉴定 ? 作为医院内感染流行病学调查的手段之一 如何进行药物敏感性试验？ (一)方法学 ? 稀释法 – 试管稀释法（肉汤稀释法） – 平板稀释法（琼脂稀释法） ? 扩散法（纸片法） – Kirby-baure(K-B)法 – Stockes法 ? E-Test ? 自动化仪器 稀释法 原理：以一定浓度的抗菌药物与含有被测 菌株的培养基进行一系列的对倍稀释经培 养后，观察最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration MIC）。 实验室中常用的几种MIC测定方法 2μg/ml 1μg/ml 0.5μg/ml 肉汤(试管)稀释法 肉汤微量稀释法 琼脂(平板)稀释法 几个重要的指标 MIC(最低抑菌浓度minimal inhibitory concentration) – 在体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度 ? MBC(最低杀菌浓度minimal bactericidal concentration) – 在体外能够使细菌总数减少(杀灭)99.9%以上的最低药物浓度。 ? MIC50、MIC90 – 在一批实验中能抑制50%或90%受试菌所需的MIC。 ? MBC50 MBC90 – 在一批实验中能使50%或90%受试菌的活菌数减少99.9%所需的MBC。 ? 临界浓度（breakpoint） – 根据抗菌药物抑制细菌生长所需要的MIC，结合常用剂量时该药所血药浓度，划定细菌对各种抗菌药物敏感或耐药的界限。 扩散法(纸片法) 原理：将浸有抗菌药 物的纸片贴在涂有细 菌的琼脂平板上，抗 菌药物在琼脂内向四 周扩散，因此敏感细 菌在纸片周围一定距 离内的生长受到抑 制，根据抑菌圈的大 小即可推知该药物的 最低抑菌浓度 （MIC）。 扩散法：K-B 操作： ? 制备0.5MacFarland Standard（1.5×108CFU/ml）菌液 ? 无菌棉签蘸取菌液，在管壁内将多余菌液旋转挤去后，在琼 脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板 内缘涂抹1周。 ? 室温干燥或35℃干燥5-15分钟 ? 用纸片分配器或无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面纸片间距20mm 纸片离平板内缘15mm。 如何制备菌悬液？ 菌落？ 至少3个菌落，为什么？ 可能丢失耐药细菌 (携带有耐药质粒的耐药菌株) …. 如何阅读结果（纸片法） ? 工具：游标卡尺，尺子 ? 光源：反射光、透射光 ? 阅读： 药敏平皿背衬不 反光的黑色背景，用 肉眼观察。 纸片法结果的正确阅读 ? 正确的光源：反射光 ? 不反光的黑色背景 ? 完全抑制的抑菌圈直径， 包括纸片的直径 ? 抑菌圈的界限应该是以肉眼观察没有明显 的可见细菌生长区域 ? 在抑菌圈边缘微弱生长的、仅能在放大镜 下才能观察到的细小菌落应忽略。 应注意葡萄球菌、肠球菌的药敏结果阅读 ? 苯唑西林、利奈唑胺和万古霉素对葡萄 球菌的抑菌圈 ? 万古霉素对肠球菌的抑菌圈 ? 任何有可见的菌落生长均应视作对上述 抗菌药物耐药 ? 需在透射光（Transmitted light）下阅读， 遇不敏感的结果需用稀释法测定MIC确证 要使用透射光 不要用反射光 应注意磺胺类药物的结果阅读 培养基内可能有磺胺类药物的拮抗物，如 胸腺嘧啶、核苷类物质。允许有轻微生长的薄菌苔 忽略20%或更低生长的薄菌苔，测量抑菌圈直径较为明显的细菌生长界限 应注意变形杆菌属细菌的药敏结果阅读 ? 变形杆菌属细菌的生长呈迁移性 ? 在某些抗菌药物抑菌环内可见霾样（淡淡生长的云雾状）迁徙生长的变形杆菌属细菌的菌苔 ? 抑菌环内由于变形杆菌属细菌迁徙生长出现的霾样生长可忽略不计 ? 忽略迁移性 应注意溶血性细菌的结果阅读 ? 链球菌 – B-溶血性链球菌 – 草绿色链球菌 – 肺炎链球菌等 ? 应忽略溶血圈，读取生长完全被抑制处 应注意产色素细菌的结果阅读 ? 有些细菌会在生长过程中产生色素 – 铜绿假单胞菌 – 黄杆菌 – 沙雷菌 ? 应忽略色素分泌圈，读取生长完全被抑 制处 抑菌圈内有菌落，怎么办？ 大肠