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基因组改组技术选育嗜果糖、耐S02葡萄酒酵母 LANZHOU UNIVERSITY OF TECHNOLOGY 毕业设计（论文） 学生姓名 学 号 专业班级 指导教师 学 院 答辩日期 摘要 以C?l、C?2、C?3、C?4四株酵母菌作为出发菌株，用紫外线和化学诱 试剂进行诱变，分别用含高浓度S02和果糖的培养基筛选，获得2株S02 耐受性提高的菌株C-2-4和C-4-2和2株果糖利用率提高的菌株C-1-8和 C-3-lo再以这4株菌株作为正突变库，通过两轮的基因组改组，获得5株 耐S02性能和嗜果糖性能都较好的酵母菌株。其中第一轮改组后的菌株 A-2对S02的耐受性与C-4-2相比提高59.7%, A-7利用果糖特性与C-1-8 相比提高了 20%。第二轮改组后的菌株B-1的耐S02特性与C-4-2相比提 高了 14%,利用果糖特性与C?l?8相比提高了 34%o 关键词：葡萄酒酵母；基因组改组；耐S02；嗜果糖；原生质体融合 Abstract By UV induced mutagenesis and chemical mutagenesis methods of wine yeast strai n C-l, C-2, C-3 and C-4?a nd scree ning on nu trie nt medium containing high concentrations of SO2 and fructose, we obtained 2 SO2 toleranee improved strains C-2-4 and C-4-2 and two fructose utilization increasing strains C?l?8 and C-3-1. We made use of genome shuffing to the library of 4 generate improved strains in this work.We shuffed twice these improved strain by protoplast fusion and finally obtained 5 strains with higher SO2 toleranee and addicted to fructose? The SO2 toleranee of the first round of the reconstituted strain A-2 improved 59.7% compared with the C-4-2, A-7 features the use of fructose in creased by 20% compared with C? 1-8. The SO2 toleranee of the second round of Genome Shuffling strain has a 14% increase compared with the C-4-2, and the use of fructose characteristics in creased by 34 % compared with C-l-8. Key words:Wine yeast; Genome Shuffli ng; Resista nee to SO2; Addicted to fructose; Protoplast fusion 2 摘 要 1 Abstract 2 一、综 述 5 （一） 葡萄酒酵 母 5 （二） 葡萄酒酵母菌种的选 育 5 1?自然选 育 5 诱变育 种 6 杂交育 种 6 ?细胞融合育 种 7 ?基因工程育 种 7 （三）基因组改组技 Genomeshuffling技术的具体方 7 Genomeshuffling 的优 TOC \o 1-5 \h \z 点 8 （四） 酵母菌对S02的耐受性及研究现 状 8 （五） 酵母的嗜果糖特性及研究现 状 8 （六）本课题的研究目的和研究意 义 8 二、材料与方 法 （一）材 料 …….8 1 ?菌 株 …….8 2.试剂和药 （二）实验方 法 9 1?出发菌的选 TOC \o 1-5 \h \z 择 9 2.出发菌株对S02耐受性实 验 9 3 ?果糖耐受性实 验 9 4?发酵液中果糖的测定（半胱氨酸一咔畔比色 法） 9 5.紫外线诱 变 10 （1） 诱变剂量的确 定 10 （2） 诱变处理方 法 10 ?化学诱 变 10 （1）诱变剂量的确 （2）诱变处理方 TOC \o 1-5 \h \z 法 10 ?嗜果糖诱变株的筛 选 10 8?耐SO2诱变株的筛 选 10 9 ?第一轮融 合 10 （1）