人骨巨细胞瘤多核巨细胞糖皮质激素受体-中国骨质疏松杂志.pdfVIP

中国骨质琉橙杂志 1999年11月第5卷第4期 45 人骨巨细胞瘤多核巨细胞糖皮质激素受体 mRNA的表达 ■瘤杂骨多破棱骨细的交方母骨胞摘样法细细细巨要和胞胞胞骨黄共样胞也琳表细浆巨骨聚多以达焦棱胞瘤丘含大显中细巨微细量有巨铝胞多梭镜胞糖世瘤糖分的皮作析细质中巨皮为表部检胞激的质体铭达表测激素外达情丁素受豪研糖糖体况受m体皮皮究人结m质质RN。破果激激RAN表骨素素A细此受受骨；明胞体体外本m研反细提模R巨的，，N应胞示A究型在首， 导的骨质丢失过程中，破骨细胞可能也是其作用的靶细胞 美键词 破骨细胞样多棱巨细胞 糖皮质激素受体 荧光原位杂交 糖皮质激素(Glucocorticoid，()诱导的 tonin，receptor，CTR)反义RNA探针的质粒分 骨质琉松是一种常见的医源性代谢性骨病，其 别 为 pBluesenptSK(+)和 PCR—senptSK 中发病率仅次于绝经后骨质疏松症和老年性骨 (+)，由西澳大学骨科实验室台成。T3、T7 质疏松症[1一。已证实人成骨细胞和骨细胞其有 RNA聚台酶及地高辛(DIG)RNA标记试剂 糖皮质激素受体 (Glucocorticoidreceptor． 盒、Fluorescentantibodyenhancerset购 自 GR)]，GC可通过受体介导直接抑制成骨细胞 BoehringerMannheim公司。抗酒石酸酸性磷 的功能、诱导成骨细胞和骨细胞凋亡，从而减少 酸酯酶 (Tartrateresistantacidphosphatase 骨质形成0]。然而GC对破骨细胞及骨吸收的 TRAP)检测试剂盒购 自Sigma公司。所有 作用机制 目前尚不明确，因而检涣1人破骨细胞 RNA原位杂交试剂均用DEPC水配制。 是否存在GR，对阐明GC对破骨细胞的作用机 1．2 方法 理十分重要。本研究以骨巨细胞瘤中多核巨细 12．1DIG标记反义RNA探针的制备，参见 胞作为人破骨细胞的模型，采甩荧光原位杂交 DIGRNA标记试荆盒说明书。载有2．ckb鼠 方法检剩了破骨细胞中，GRmRNA的表达情 GRcDNA450bp和CTRcDNA片段的质粒分 况。 别用xhoINotI限制性 内切酶制备线性 DNA模板，分别用T3和T7RNA聚合体外转 1 材料和方法 录合成具有DIG标记的反义RNA探针。 1．1 材料 1．2．2 组织印片及冰冻切片的制备：将冻存组 骨巨细胞瘤新鲜冻存(一80C)标本由中山 织置预冷的PBS中解冻，取部分组织轻压印片 医科大学病理教研室 1996～1998年问收集，共 于硅化处理的载玻片上，其余部分置恒冷箱制 10例。用于制备鼠GR和人降钙素受体(Calci一 备冰冻切片(厚6～8gni)。玻片室温干燥 l5～ 20分钟，待细胞组织完全贴附 作者单位：510089 广州中山医科大学病理教研室(黄琳、丘 钜世)澳大利亚西澳大学骨科(郑铭豪) 1．2．3 破骨细胞的标记染色：TRAP细胞化 作者简介：黄琳，1971年6月出生．1994年中国医科大学医 疗幕本科毕业t并考人中山医科大学病理学专业硕士．96年直接 学染色参见TRAP检测试荆盒说明书，结果用 转为博士生t1998年6月赴澳大利亚西澳大学从事骨病和骨肿 普通光镜观察。 瘤的分子生物学研究．有一篇论文已被 《美国病理学杂志接受。 46 CHINESEJOURNAL0F0STEOPOROSISVo1．5No．41999 1．2．4 RNA原位杂交：参见Huang 等描述 I、Ⅱ、IV孵育抗体分别为 antiDIG、anti— 的方法。4％多聚甲醛固定玻片 3分钟．0．2 mouse—IgDIG和anti—DIGfl