离体蛙心灌流教学课件.ppt

滴加2%氯化钙 结果分析——CaCl2的作用 [Ca2+]o ↑ → Ca2+内流↑ → [Ca2+]i↑ → 兴奋—收缩耦联↑ →收缩力↑ 舒张期Ca2+与肌钙蛋白不完全解离，基线上移，产生Ca2+强直 滴加1%氯化钾 结果分析——KCl的作用 K+与Ca2+在心肌细胞膜上有竞争性抑制作用 [K+]o ↑ Ca2+内流↓ 收缩力↓ 膜内外K+浓度梯度减小 工作细胞静息电位绝对值减少 Na+通道失活 心肌兴奋性完全丧失 停止于舒张状态 实验记录 项 目 记录图 描 述 （心肌收缩力、心率、舒张是否完全） 正常心搏曲线 1:10000 Adr 1:10000 ACh 2%CaCl2 1%KCl 注意事项 1、成功插管：勿剪破心脏血管、勿结扎静脉窦。 2、及时抢救： 3、前后对照：每步加药前均应设有药前“对照”。 4、液面相同： 如加入ACh和KCl后，要及时冲洗避免过度抑制而死亡。 每次冲洗后应调整液面相同。 5、量效关系：先加1滴观察效应，不明显再加。 思考题 1、正常人体心脏起搏点位于哪儿？ 2、两栖类动物心脏起搏点位于哪儿？ 3、判断蛙心插管插入心室腔的标准是什么？ 4、如何观察正常的蛙心搏动曲线？ 离体蛙心灌流 主要内容 实验目的 实验原理 实验动物 实验器材和药品 实验步骤 观察项目 注意事项 思考题 实验目的 2、学习离体蛙心的灌流方法 1、了解离子、激素及神经递质 对离体心脏活动的调节作用 实验原理 心肌具有自动节律性。 心肌细胞生物电活动的基础是离子的跨膜移动，因此改变灌流液的离子浓度或成分，可以引起心脏活动的改变。 神经、体液因素对心脏活动的调节是通过神经递质或激素与心肌细胞膜上相应的受体结合，引起增强或减弱心脏活动的效应。 实验动物 蟾蜍 蛙心离体后，用任氏液灌注时，在一定时间内，仍保持有节律的舒缩活动 实验器材与药品 器材：蛙类手术器械、肌肉张力换能器、滑轮、 蛙心夹、蛙心插管、蛙板、铁支架、 RM6240多道生理信号采集处理系统 营养液：任氏液（参见实验教材173页，附表8） 药品：1:10000肾上腺素（Adr）溶液 1:10000乙酰胆碱（ACh）溶液 2%CaCl2 1%KCl 实验步骤 （一）离体蛙心的制备 1、破坏蟾蜍的脑和脊髓 2、背位固定于蛙板上 3、打开胸腔暴露心脏，观察心脏结构 4、主动脉干的后方备线 5、左动脉干根部向心方向剪一斜口 6、蛙心插管，系线 7、游离蛙心 （二）连接实验装置 （一）离体蛙心制备 1、破坏蟾蜍的脑和脊髓 枕骨大孔 2、背位固定于蛙板上 3、打开胸腔暴露心脏 观察心脏结构识别静脉窦、心房和心室 （腹面） （背面） 两栖类动物的心脏为两心房、一心室。 心脏的起搏点是静脉窦。静脉窦的自动节律最高，心房次之，心室最低。 正常情况下，心脏的活动节律服从静脉窦的节律，其活动顺序为：静脉窦、心房、心室。 4、主动脉干的后方备线 （腹面） 5、左动脉干根部向心方向剪一斜口 6、插管 系线 判断是否插入心室 插管内事先装好干净的任氏液 此处一定要扎紧且不能松脱，以防漏液 7、游离蛙心 张力换能器 （二）连接实验装置 蛙心插管 蛙心 肾上腺素 乙酰胆碱 CaCl2 KCl2 RM6240处理系统使用方法 一、开始示波 点击“实验”，选“循环”，选“蛙心灌流”。 选择扫描速度为“5.0 s/div”. 根据收缩力度调整灵敏度。 点击“工具”，选“坐标滚动”，将图形调至中央。 二、开始记录 对图形做标记 三、结束实验 整理图形，打印输出 开机、启动RM6240处理系统 观察项目 1、描记一段正常心搏曲线 2、滴加1:10000的肾上腺素，描记，冲洗 3、滴加1:10000的乙酰胆碱，描记，冲洗 4、滴加2%CaCl2，描记，冲洗 5、滴加1%KCl，描记，冲洗 ???????? ???????? ???????? ???????? 正常心搏曲线 曲线的幅度 —— 心脏收缩的强弱 曲线的疏密 —— 心率的快慢 曲线的规律性 —— 心跳的节律性 曲线的基线 —— 心室舒张的程度 滴加1:10000肾上腺素 结果分析——Adr的作用 Adr与心肌?1受体结合 cAMP↑ 激活心肌膜上的钙通道 Ca2+内流↑、肌浆网释放Ca2+↑ 心率加快、房室交界传导加快、 心房肌心室肌收缩能力加强 心肌收缩收缩力↑ 滴加1:10000乙酰胆碱 结果分析——ACh的作用 ACh与心肌细胞膜M受体结合 K+通透性↑，Ca2+通透性↓ K+外流↑ 3期K+外流↑、最大复极电位↑ 最