mTOR通路抑制剂依维莫司对胶质瘤自噬作用地研究.pdfVIP

预移植瘤的生长，明确依维莫司对不同细胞株抑制情况及其机制。 研究方法： 1．免疫组织化学染色检测32例人脑胶质瘤标本中mTOR信号通路相关蛋白表达情况， 并用Western Blot法检测人脑胶质瘤标本的mTOR蛋白的表达情况。 抑制剂依维莫司对人脑胶质瘤细胞抑制作用；细胞凋亡荧光Hoechst33342／PI双染发 测定细胞细胞凋亡；单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色检测自噬囊泡；流式细胞法定量 观察细胞周期；Westernblot法进一步分析验证依维莫司对胶质瘤细胞作用的通路及其 机理。 腔注射，采用免疫组化、细胞周期及凋亡、肿瘤血管密度等方法进行测定，了解依维 莫司对不同胶质瘤细胞株移植瘤的抑制作用，并探讨其可能引起的机制。 研究结果： 质瘤与对照组表达无统计学意义(PO．05)。 2．体外培养的胶质瘤细胞株中，不同细胞株受抑制程度均随着依维莫司浓度的增加而增 最不敏感的。 3．细胞凋亡荧光Hoechst33342／PI双染结果显示各株胶质瘤细胞均发生了一种不同于凋 亡的死亡方式，可能为细胞自噬。行MDC活细胞染色显示，依维莫司作用于胶质瘤 细胞增加了酸性囊泡样细胞器(自噬泡)的形成，可认为依维莫司可促进胶质瘤细胞自噬 的形成。三种细胞株均给与IC50剂量的依维莫司，在48小时后进行流式细胞周期分 现明显的细胞凋亡。 4．用Western p70S6K的非磷酸化和磷酸化水平的影响。在所有三个细胞株中，随着依维莫司剂量的 ¨ 并没有发现具有明显的变化，只有4E．BP．1的非磷酸化表达水平亦随依维莫司浓度的 升高而有所减少。 在第12天末开始给与裸鼠依维莫司后发现，各细胞株实验组裸鼠移植瘤体积较对照组 明显减小，并通过公式测量不同细胞株的抑瘤率，U．87MG，SHG．44，U251细胞株 的抑瘤率分别为30．6％，42．1％，29．7％，依维莫司对胶质瘤有明显的抑制作用。 6．对不同胶质瘤细胞株行细胞凋亡测定，各细胞株中实验组较对照组的凋亡并没有明显 的统计学差异(P0．05)。行细胞周期测量，各细胞株中实验组较对照组均有明显的 SHG一44次之，U251最小。 7．行肿瘤血管密度测定，细胞株U．87MG、U．251中实验组肿瘤血管密度值较对照组没有 胞株间没有发现明显差异。 表达减少，VEGF表达明显减少。 结 论： 1．mTOR抑制剂依维莫司通过阻滞细胞周期，诱导胶质瘤细胞的自噬，并抑制肿瘤血管 的生成，从而发挥抗胶质瘤的作用。 2．mTOR信号通路能够作为治疗胶质瘤的一个新靶点，为脑胶质瘤的治疗提供新的思路。 关键词：胶质瘤；自噬；凋亡；依维莫司；mTOR；移植瘤 III studiesofthe invivo ThemTOR inhibitoreverolimus pathway differentcell andcell cycle autophagy glioma ABSTRACT BACKGRUUND isthemost tumor,the centralnervous malignant present Gliomaisa system good，highly treatment other