实验一氨基酸及蛋白质的性质.docxVIP

第一部分基础生化实验实验一 氨基酸及蛋白质的性质 【实验目的】 加深理解所学有关的蛋白质性质的理论知识 常握氨基酸和蛋白质常用的定性、定量分析的方法及原理 一、蛋白质呈色反应 蛋白质的呈色反应是指蛋白质所含的某些氨基酸及其特殊结构，在一定条件下可与某些试剂发生了 生成有色的物质的反应。 不同蛋白质分子所含的氨基酸残基也是不完全相同，因此所发生的成色反应也不完全一样。另外呈 色反应并不是蛋白质的专一反应，某些非蛋白质类物质（含有-CS-NIK -cii2-nh2. -CRH-NH2. -CHOH-CH2NH2 等基团的物质）也能发生类似的颜色反应。因此，不能仅仅根据呈色反应的结果为阳性就来判断被测物 质一定是蛋白质。 注意：本次实验为定性实验，试剂的量取用滴管完成。 （一）双缩豚反应 【实验原理】 当尿素经加热至180°C左右时，两分子尿素脱去一分子氨，进而缩合成一分子双缩腺。其在碱性条 件下双缩腺与铜离子结合成红紫色络合物，此反应称为双缩聯反应。其反应过程如下： h2n+ ；c=o h2n + ；c=o h2n △ 180 °C O O II II h2ncnhcnh2 + Cu2+OH-? ￥ + Cu2+ OH- ? ￥ 多肽及蛋白质分子结构中均含有许多肽键，其结构与双缩腺分子中的亚酰胺键相同。因此，在碱性 条件下与铜离子也能呈现出类似于双缩腺的呈色反应。其反应过程如下： NH2IR-CHIo=c|\IHR-CHIo=c NH2 I R-CH Io=c |\IH R-CH Io=c l\IH R-CH-C + Cu2+ N wwvw OH R-CH 2 - HC 一 HHINICHO 【试剂】 蛋白质溶液（鸡蛋清用蒸憎水稀释10倍，通过2-3层沙布滤去不容物） 0.1%甘氨酸溶液 0.01%精氨酸溶液 10%NaOH 溶液 1%CuSO4 溶液 尿素结晶 【实验操作】 双缩豚的制备 取少许尿素结晶（约火柴头大小）放入干燥的试管中，微火加热至尿索熔解至硕化，刚硬化时立即 停止加热，此时双缩豚即已形成。冷却后加10%氢氧化钠溶液约51、并震荡，再加入1%硫酸铜溶液2滴, 再震荡，观察颜色的变化。 注意：a.在操作过程中试管不能冲向其他人以防止烫伤： 控制加热的时间既不能过长也不能过短； 加热时火不能太大，防止碳化。 观察现象 另外取试管4支，按照下表加入各种试剂，观察并解释现象。 表1. 试剂 — 管号 1 2 3 4 蛋白质样液（ml） 1.0 0.01%精氨酸(ml) 1.0 0. 1%甘氨酸(ml) 1.0 10%Na0H (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0 蒸憎水（ml） 1.0 现象 （二）苗三酮反应 【实验原理】 在弱酸条件下（P1I5-7）,蛋白质或氨基酸与苗三酮共热，可生成蓝紫色缩合物。此反应为一切蛋白 质和?—氨基酸所共有（亚氨基酸如脯氨酸和轻脯氨酸产生黄色化合物）。含有氨基的其他化合物亦可发 生此反应。 第一步: OHO II CR-C—COOHnh2OHOHC OH O II C R-C—COOH nh2 O H OH C RCHO + NH3 co2 第二步: OOO+ 2H2O O O O + 2H2O 【试剂】 蛋白质样液：（与双缩SR反应相同） 0.1%甘氨酸溶液：（与双缩服反应相同） 0.2%苗三酮溶液 【实验方法】 取试管2支，分别加入蛋白质样液及0. 1%甘氨酸溶液lml,然后各加入苗三酮溶液0. 5ml,混匀 后于沸水浴屮加热数分钟，观察现象，记录结果并解释原因。 （三）蛋白黄反应 【实验原理】 在蛋白质分子中，具有芳香坏的氨基酸（如酪氨酸，色氨酸等）残基上的苯坏经硝酸作用可生成黄色 的硝基化合物，在碱性条件下生成物可转变为桔黄色的硝醍衍生物，反应为： OH + HNO3h2o OH + HNO3 h2o + NaOH 多数蛋白质分子含冇带苯坏的氨基酸，所以都会发生黄色反应。苯丙氨酸不易硝化，需加少量浓硫 酸后才能够发生黄色反应。 【试剂】 蛋白质溶液（与双缩腺反应相同） 浓硝酸 20%Na0ll 溶液 0.1%石炭酸溶液 【实验操作】 取1%石炭酸溶液约lml放在试管内，加浓硝酸5滴，用微火小心加热，观察结果。 取干燥洁净试管1支，加蛋白质样液1ml和浓硝酸5滴，出现沉淀，加热，不必至沸腾，则沉 淀变成黄色，待试管冷却后，向两管各加20%Na0H溶液使成碱性，观察颜色变化，记录结果并 解释现象。 （四）坂口反应 【实验原理】 ch2ch2CH2ch2CH一NH2COOH蛋白质在碱性溶液中与次氯酸盐（或次溟酸盐）和 ch2 ch2 CH2 ch2 CH一NH2 COOH ch2 CH—NH2 COOH 生成的氨可被次漠酸钠氧化生成氮。在次澳酸钠缓慢作用下，有色物质继续氧