链霉菌L10608产木聚糖酶纯化及特异水解底物生成-食品与发酵工业.pdfVIP

1—1802／ts．201705009 DOI：10．13995／j．enki．1 链霉菌L10608产木聚糖酶纯化及特异水解底物生成益生元型产物研究 4 熊科1’2，熊苏碉L2，崔晓亭1’4，侯洁1…，鲍艺佳1’2，孙佳月1’4，李秀婷1’2 1(北京工商大学，北京食品营养与人类健康高精尖创新中心，北京，100048) 2(北京工商大学，北京市食品添加剂工程技术研究中心，北京，100048) 3(北京工商大学，北京市风味化学重点实验室，北京，100048) 4(北京工商大学，北京市质量与安全重点实验室，北京，100048) 摘 要 研究对前期筛选的一株产木聚糖酶菌株L10608进行鉴定，判定其为链霉菌。并对该菌株所产木聚糖 酶进行纯化得到电泳级纯度木聚糖酶L10608一Xynll。该酶蛋白质分子量为24kDa。探究L10608菌株所产木 聚糖酶以商品玉米芯木聚糖、商品燕麦木聚糖、自制水不溶性玉米芯木聚糖为底物时的水解特性，结果表明该菌 所产木聚糖酶对木三糖有很强的水解作用，以自制水不溶性玉米芯木聚糖为底物水解时效果最为明显，底物中 木三糖的含量下降了1．521 mg／mL，产物中木二糖增加了1．635mg／mL，木糖仅增加了0．180mg／mL。菌株 L10608的酶解产物中低聚木糖的产量远高于木糖，且高产低聚木糖中的主要有效成分木二糖，其水解特异性表 明该菌有潜力作为益生元型低聚木糖的生产菌株。 关键词 链霉菌L10608；木聚糖酶；分离纯化；益生元产物 木聚糖作为植物半纤维素的重要组分，是自然界 多归1。本实验从土壤中筛选得到1株L10608菌株， 中除纤维素以外含量最丰富的可再生生物质资 在前期已完成其液体发酵条件优化及水解特性初步 源…。木聚糖可被降解用于生产低聚木糖，后者具 研究发现其适合以农业废弃物玉米芯木聚糖为底物， 有降低癌症风险、抗龋齿、降低血压、降低血清胆固 开展水解产物特异性的研究。基于此本研究通过形 醇、抑制病原菌和腹泻润肠通便等作用，可应用于酸 态学、分子生物学手段对研究菌株进行鉴定，并纯化 奶、焙烤食品、功能性食品等B1。目前，生物酶降解 其所产木聚糖酶和对其产酶性质进行研究，针对目前 法是制备低聚木糖的主要方法之一¨。，木聚糖酶来 酶法生产中反应过程难以控制，低聚木糖功能性成分 源主要依靠真菌、细菌等微生物的发酵产生，链霉菌 产率低，提纯成本高，难以实现规模生产的问题。研 属在低聚木糖的工业化生产中已实现初步的应 究采用不同种木聚糖底物，用HPLC分析考察菌株所 用H。一，具有一定的安全性与应用潜力。而目前酶法 产木聚糖酶水解产物特性，以期为工业生产益生元型 生产采用微生物来源的木聚糖酶水解木聚糖时除了 低聚木糖提供理论指导。 存在菌株本身产酶活力低下外，水解产物中木二、木 1 材料与方法 三糖等特异性成分含量也大多低于30％且含大量木 糖、阿拉伯糖等非功能性成分，导致后期需要较复杂 1．1材料与仪器 的工艺和高额的成本来对酶解产物进行提纯，以提高 功能低聚木糖纯度(60％～70％)‘6。1。目前报道的 只有极少数菌株具有底物水解高酶活力，且水解底物 ma)；木糖标品(木糖、木二糖、木三糖、木四糖)色谱 时产物中木二糖、木三糖比例超过50％¨1。 纯，上海安谱实验科技股份有限公司；硝酸铵、盐酸、 微生物来源的木聚糖酶普遍存在于自然界中且 氢氧化钠、乙酸、醋酸钠、柠檬酸、三钠无水亚硫酸钠： 种类繁多，其中细菌和霉菌来源的木聚糖酶研究较 分析纯，北京化工厂；玉米芯木聚糖(实验室提取)。