实验五大黄中游离蒽醌的提取.docxVIP

实验五大黄中游离蔥醍的提取 大黄为寥科植物掌叶大黄(Rheum Palmatum L.),药用大黄(R?officinale Beill)和唐古特大黄(R.tanguticum Maxim.ex Balf)的根及根茎。是泻下、 健胃、清热、解毒的常用屮药。 大黄中含有多种疑基蔥醜类化合物，它们在植物中主要以威的形式存 在，总含量为2-5%,大黄中主要的耗基蔥醍类化合物有大黄酚⑴、大黄 素(2)、大黄酸(3)、大黄素甲醞(4)、芦荟大黄素⑸及其貳类。R1 R2 大黄酚 TOC \o 1-5 \h \z OHOOHH CH3 OH CH3 H COOH OCH3 CH3 H CH2OH大黄素大黄酸RR2大黄素甲醯芦荟大黄 素 大黄酚(Chrysophanol)为金黄色片状结晶(乙醇或苯),mp.196-197 °C, 能升华，可溶于丙酮、乙醞、氯仿、甲醇、乙醇、热苯和氢氧化钠水溶液， 微溶于石油瞇、乙瞇，不溶于水、碳酸钠和碳酸氢钠水溶液。 大黄素(Emodin)为橙黄色针状结晶(乙醇或冰醋酸),mp.256-257°C, 能升华，易溶于稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液，可溶于乙醇、丙酮， 在乙醞、氯仿、苯、四氯化碳、二硫化碳等溶剂中溶解度较小，几乎不溶 于水。 大黄酸（Rheine）为黄色针状结晶（升华法），mp.321 —322°C, 330°C 分解，易溶于碱水液、卩比噪，微溶于乙醇、丙酮、乙醯、氯仿、苯、石油 瞇。几乎不溶于水。 大黄素甲讎（Physcion）砖红色针状结晶（苯），mp.203-207 °C,能 升华，溶解性质与大黄酚相似。 芦荟大黄素（Aioeemodin）为橙黄色针状结晶（甲苯）,mp.223-224 °C, 能升华，可溶于乙瞇、热乙醇、苯、稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液。 疑基蔥醍貳有大黄素甲醸葡萄糖貳，大黄素葡萄貳，大黄酸葡萄糖貳, 大黄酚葡萄糖貳，大黄素-1-O-B-D-葡萄糖貳，芦荟大黄素-o-0-B-D-葡萄糖 试。 一、 实验目的 学会PH梯度萃取法分离酸性成分的原理及操作技术。 学会两相酸水解法的操作技术。 学会柱色谱的操作技术。 学会径基蔥醍类成分的化学检识及薄层层析检识方法。 二、 实验原理 本实验利用大黄中的疑基蔥醍经酸水解成游离蔥醍甘元，苛元可溶于 三氯甲烷而被提出；再利用各軽基恵醍类化合物酸性不同，采用PH梯度 萃取法结合柱色谱法分离而得到大黄素单体。 三、 实验内容 （一）游离恵醍的提取 取大黄粗粉50g,置于500ml的园底烧瓶中，加氯仿——20%硫酸（5： 1） 300ml ,水浴加热回流3~4小时，纱布过滤，放冷减压抽滤，得到氯 仿液。 （二） PH梯度萃取法分离 将上述氯仿液转移至500ml的分液漏斗屮，加5%碳酸氢钠水溶液 80ml （先用pH试纸测定其pH值）分三次萃取（注意萃取时放置分层的 时间应稍长些，以免萃取效果不好），合并三次碳酸氢钠萃取液，在搅拌 下小心滴加浓盐酸调至pH2?3 （观察萃取，酸化时溶液的颜色变化），放 置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，则其主要含大黄酸，留作鉴 定用。 将上述经碳酸氢钠萃取过的氯仿液用5%碳酸钠水溶液100ml （先 用pH试纸测定其pH值）分三次萃取，合并碳酸钠萃取液，在搅拌下小 心滴加浓盐酸调至pH2?3,放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干 燥，则其主要含大黄素，留作分离用。 将上述经碳酸钠萃取过的氯仿液用5%氢氧化钠水溶液100ml （先 用pH试纸测定其pH值）分3次萃取，合并氢氧化钠萃取液，在搅拌 下小心滴加浓盐酸调至pH2?3,放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性， 干燥，则英主要含大黄酚、芦荟大黄素和大黄素甲醍，留作鉴定用。 （三） 柱色谱精制大黄素 湿法装柱 取柱层析用硅胶10g ,力H 30ml （PE： EtOAc=7： 3）混合溶剂搅拌均匀， 装入合适的色谱柱中，并用相同的混合溶剂洗脱至液面不再发生变化 湿法上样 将上述大黄素的粗品溶于少量（PE： EtOAc=7： 3）混合溶剂屮，用滴管滴 于色谱柱的顶端。 洗脱 TLC检识 将相同的流份合并，回收溶剂用得纯品大黄素。 （四）检识 碱液试验：取上述分离所得游离蔥醍类化合物结晶各5mg置于小 试管中，力U 95%乙醇lml溶解，再加10%氢氧化钠水溶液2~3滴，观 察溶液颜色变化。凡具有邻、对位酚轻基的蔥醍类化合物应呈紫■蓝色，其 它疑基蔥醍类化合物多为红色。 醋酸镁试验：取上述分离所得游离蔥醍类化合物结晶各5mg置于 小试管中，加95%乙醇lml溶解，再满加0.5%醋酸镁乙醇液2-3滴, 观察洛液颜色变化。凡具冇Q ■轻基的蔥醍类化合物应呈橙红色，具冇间位 二羟基的蔥醜昆类化合物应呈橙■红色，具有对位二轻基的蔥醜类化合物 应呈紫■红紫色，具有邻