车宝泉液相色谱知识及应用.pptVIP

液相色谱知识及应用化学室车宝泉;第一部分:液相色谱简介;HPLC的仪器配置及流程;等度及高压梯度泵系统;低压梯度系统;;1 仪器方面 仪器模块化，一体化， 毛细管HPLC 2. 仪器联用技术发展液相色谱－质谱液相色谱－核磁共振光谱 液相色谱-气相色谱等;;第二部分;对液相色谱柱的了解;高效液相色谱柱概况;常见的分配柱填料;不同品牌色谱柱;色谱柱保护;第三部分:知识及应用;概念:色谱条件;概念:系统适用性实验;系统适用性实验;系统适用性实验;系统适用性实验;定性方法：;应用实例;单一HPLC鉴别有局限性需结合以上方法可以和薄层色谱，二极管阵列检测器阵列。* 要做到100％确定，必须和质谱结合进行;光电二极管矩阵检测器;定量方法：HPLC为首选容量分析、紫外光谱法的局限性实例醋酸地塞米松片：紫外光谱法不法厂家用醋酸泼尼松代替盐酸小檗碱片：滴定法，广东一厂家连续生产掺伪，含大量杂质 抗生素;定量方法;外标法定量（二）;第四部分:HPLC问题的故障排除;合理的逻辑判断 － 将会节省解决问题的时间;液相色谱对色谱泵的要求;简化问题 － 评估对试验室效率的影响 － 观察色谱图 － 尝试分类问题 － 最先对最容易的部分进行故障排除 －; 填装良好的色谱柱在系统、连接状况皆良好的状况下，色谱峰形很好;色谱图中所有色谱峰变形;色谱柱内空隙 － 高反压，扭曲的或双峰; ;进样体积 进样器（密封垫问题） 连接管线，特别是： 进样器至色谱柱 色谱柱至检测器 接头及筛板 检测器的检测池体积 色谱柱本身 色谱柱内的死体积 筛板阻塞;下图是用0.04″内径的管路连接时测柱效的色谱图： 柱效：4000;柱头有死体积 - Channeling;色谱柱塌陷的影响及原因;硅胶溶解; ;;所有色谱峰都变坏的化学问题;色谱图中某些色谱峰变形;Minutes; ;Time (min);6.25 μg injected;常见HPLC问题的故障排除; ; 所有色谱峰保留时间加长或缩短 泵流速问题 检测实际泵流量 — 体积/时间 错误的色谱柱类型 与C18相比，C8保留较弱。或不同品牌（含碳量不同）的C18柱 温度问题 温度升高，??留变短，温度降低，保留加长 流动相中有机相的比例 有机相比例增加，保留时间降低 有机相比例降低，保留时间增加;保留时间重现性;流动相配制; ;保留时间重现性：pH;pH;保留时间重现性;使用离子对流动相的色谱柱 明显需要较长的平衡时间 因为，一般在一个色谱柱中： 1 μmol/m2 300 m2/g 2 g 表面覆盖率 硅胶表面积 色谱柱中的填料量 覆盖此色谱柱需要相当于600μmoles的离子对试剂，如果流动相中PIC试剂的浓度是每升1mM，就需要600ml溶剂 在1ml/min流速下，需要600分钟（10小时）;样品中不含有离子对试剂;疏水塌陷; 停止输液时，迫使水相流动相进入孔中的压力降低为零。压力降低时，疏水的孔表面会排斥极性流动相，使孔中不浸润 － “dewet the pore”; 等度色谱：宽峰；一般来自以前的进样，或来自于样品中的氧气及甲醇的混合物（低波长检测时），但脱气良好的流动相中不会发生;;鬼峰的来源：进样容器;;