实验设计-温惠铭.docx

13301050212 温惠铭 实验设计 实验设计内容和要求： 已知： （1）A药物具有保护心肌细胞免受缺血损伤的作用； （2）心肌细胞缺血过程中B基因的表达产物B蛋白表达量会发生改变。 试通过设计细胞生物学实验明确 （1）B基因的表达产物与心肌细胞缺血间的关系？ （2）在A药物保护心肌细胞免受缺血损伤过程中，B基因的表达产物是否参与其中？ （1） Ⅰ 明确心肌细胞缺血会导致B基因表达产物增加或减少。 设对照组 ①新鲜正常心肌细胞 ②新鲜缺血心肌细胞 利用SABC技术测定两组细胞中B蛋白的表达情况， 得出结论，如“心肌细胞缺血会导致B蛋白表达的增加（或减少）”等。 Ⅱ 明确B蛋白对缺血心肌细胞的作用，分为形态改变或活性改变。（假设可获得抑制B蛋白功能的化合物，称抑制剂） 1观察细胞形态及培养 设对照（有前后对照） ①正常心肌细胞，显微镜下观察细胞形态，加培养液然后培养； ②缺血心肌细胞，显微镜下观察细胞形态，加等量培养液然后培养； ③缺血心肌细胞，显微镜下观察细胞形态，加抑制剂然后培养。 培养一段时间后（时间长度要能保证B蛋白的变化引起细胞形态改变），再次观察三种细胞的形态。 结果： ②③对比，③的形态是否发生改变？是否是B蛋白在发挥作用？ ①②对比，②的形态是否发生改变？B蛋白对缺血心肌细胞形态上有什么影响？ 得出结论，如“B蛋白能促进缺血心肌细胞恢复原来的形态”等（结果可能是B蛋白对缺血心肌细胞的形态不发生作用）。 2活性改变探究-cck8法测细胞活性 设对照 ①新鲜缺血心肌细胞，加培养液，立刻做cck-8法，测OD值； ②新鲜缺血心肌细胞，加等量培养液培养一段时间，时间要足够B蛋白的变化发挥作用，之后进行cck-8法，测OD 值； ③新鲜缺血心肌细胞，加抑制剂培养相同时间，之后进行cck-8法，测OD 值； 结果：OD值越大，细胞活性越强；OD值越小，活性越弱。 ②③对比，是否是B蛋白在发挥作用？ ①②对比，谁的活性更大？B蛋白对缺血心肌细胞的细胞活性有什么影响？ 综合1、2可知B基因的表达产物B蛋白对缺血心肌细胞形态和功能的影响。 综合Ⅰ、Ⅱ可知B基因的表达产物B蛋白与缺血心肌细胞的关系。 （2） 设对照 ①新鲜缺血心肌细胞，加B蛋白抑制剂，培养；加A药物，培养一段时间。 ②新鲜缺血心肌细胞，加等量培养液，培养；加A药物，培养一段时间。 根据Ⅱ中所得B蛋白对缺血心肌细胞形态和功能的影响，检测这两组细胞，得出结果。如果结果不同，则B基因的表达产物B蛋白参与到A药物保护心肌细胞免受缺血损伤过程中；如果相同，则不参与。