光分析化学第5章 荧光及磷光光谱法.pptVIP

5.4 荧光分光光度计 仪器框图 该型仪器可进行荧光、磷光和发光分析； 5.4 荧光分光光度计 同步扫描技术 根据激发和发射单色器在扫描过程中彼此间所保持的关系，同步扫描可分为固定波长差(??)和固定能量差及可变波长三种； 同步扫描技术可简化光谱，谱带变窄，减少光谱重叠，提高分辨率； 如图。 合适的??可减少光谱重叠； 酪氨酸和色氨酸的荧光激发光谱相似，发射光谱严重重叠，但??15nm的同步光谱只显示酪氨酸特征光谱； ??60nm时，只显示色氨酸的特征光谱，实现分别测定。 5.4 荧光分光光度计 可获得三维光谱图的仪器 可获得激发光谱与发射光谱同时变化时的荧(磷)光光谱图 5.4 荧光分光光度计 磷光检测 荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量。在有荧光发射的同时测量磷光。 测量方法： （1）通常借助于荧光和磷光寿命的差别，采用磷光镜的装置将荧光隔开。 （2）采用脉冲光源和可控检测及时间分辨技术。 室温测量时，不需要杜瓦瓶。 5.5.1 无机分析 直接荧光测定法 荧光熄灭法 催化或阻化动力学荧光法 与有机试剂配合物后测量；可测量约60多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定 5.5 荧光法的应用 5.5 荧光法的应用 荧光试剂：具有苯环结构和两个以上能与金属离子鳌合的配位基团的有机试剂。 5.5 荧光法的应用 有机试剂应满足的要求： ①易与被分析物进行快速定量的反应； ②能形成稳定的强荧光物质； ③试剂本身不应有荧光，或试剂与产物的荧光光谱能够分开； ④生成的荧光络合物的激发光谱和荧光光谱应不存在明显的重叠。 5.5 荧光法的应用 5.5.2 有机分析 5.5 荧光法的应用 5.5 荧光法的应用 陈华1 黄芳2 编 夏之宁1 校 1重庆大学化学化工学院，重庆，400044 2南京市晓庄学院化学系，南京，210017 5.1 概述 5.2 荧光光谱法基本原理 5.3 影响因素 5.4 荧光分光光度计 5.5 荧光法的应用 5.6 荧光光谱法与紫外-可见分光光度法比较 5.7 实验技术 5.8 磷光分析法 荧光和磷光均为光致发光，属分子光谱。 荧光光谱法的特点： ①灵敏度高，比紫外-可见分光光度法高约2-4个数量级，适于对极其微量无机元素或有机物质进行分析测定； ②选择性高； ③方法简便快速、试样量少； ④应用还不够广泛、尚待拓宽，分析对环境因素较为敏感。 5.1 概述 荧光分析信号的产生涉及对光子的吸收（即激发）和再发射（即发光）两个过程。 两个过程之间存在一相当短的时间间隔，一般约为10-8秒； 荧光的强度取决于分子结构及其所处的环境因素；而各种无辐射回复过程的效率也与分子结构和所处环境有关； 荧光发生的内在因素在于物质的分子结构，大多数能够产生荧光的物质都含有π→π*跃迁的刚性共轭体系，包括含有苯环和其他芳环的物质及其衍生物。 5.2 荧光光谱法基本原理 5.2.1 激发过程 分子能级比原子能级复杂； 在每个电子能级上，都存在振动、转动能级； 基态(S0)→激发态(S1、S2、激发态振动能级)：吸收特定频率的辐射；量子化；跃迁一次到位； 激发态→基态：多种途径和方式(见能级图)；速度最快、激发态寿命最短的途径占优势； 第一、第二、…电子激发单重态 S1 、S2… ； 第一、第二、…电子激发三重态 T1 、 T2 … ； 5.2 荧光光谱法基本原理 5.2 荧光光谱法基本原理 电子激发态的多重度：M=2S+1 S为电子自旋量子数的代数和(0或1)； 受激三重态分子的性质与相应单重态分子的性质明显不同： ①受激单重态分子成对电子自旋方向相反，为反磁性分子，而三重态分子电子自旋平行，为顺磁性分子； ②三重态的能量比相应单重态的能量低； ③在理论上，多重性改变的跃迁（如S0→T1的跃迁）为禁阻跃迁。但通过其他途径进入，进入的几率小； 5.2.2 去活过程 5.2 荧光光谱法基本原理 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量； 延迟荧光 磷光 传递途径 辐射跃迁 荧光 内转移 外转移 系间跨越 振动弛预 无辐射跃迁 激发态停留时间短、返回速度快的途径，发生的几率大，发光强度相对大； 荧光：10-7～10 -9 s,第一激发单重态的最低振动能级→基态； 磷光：10-4～10s；第一激发三重态的最低振动能级→基态； 5.2 荧光光谱法基