氨基酸类药物课时.pptVIP

转化反应：将反应底物延胡索酸（1M、保温37℃ ，含1mM MgCl2，pH8.5）按一定流速流过反映器I，使转化率达到最大（＞95%），转化液用于分离纯化L-Asp。转化液也可以进一步进入反反应器II，同时加入磷酸吡哆醛（0.1mM），并调pH6.0，保温37℃，反应转化为L-Ala。 产品纯化与精制： 转化液 调pH2.8 5℃过夜结晶 滤干、烘干 粗品 溶于稀氨水 活性炭脱色 过滤 上清结晶 过滤、烘干 成品L-Asp （丙氨酸的过程自己看看，p397） 检验：根据相应氨基酸的性质进行检验；含量测定法多用滴定法 作用与用途：（略） 酶拆分制备L-Phe： L-Phe的性质：（略） 拆分原理：DL-Phe与醋酸酐反应生成乙酰-DL-Phe，而氨基酰化酶能专一性地水解Ac-L-Phe的酰胺键生成L-Phe，但不水解Ac-D-Phe酰胺键；因此就可以拆分DL-Phe了。另外，Ac-D-Phe可以再经消旋化生成Ac-DL-Phe，再拆分；如此反复，即可将DL-Phe全部转化为L-Phe，具体过程可描述如下： 工艺路线： 工艺过程： 固定化氨基酰化酶的制备：培养40-50h的米曲扩大曲用6倍量去离子水两次抽提，过滤、滤液用NaOH调pH6.7-7.0，按100L加1kg已处理的湿DEAE-SephadexA-50的比例混合，于0-4℃搅拌4-5h，滤取凝胶，依次用去离子水、0.1M醋酸钠、0.01M pH7.0磷酸缓冲液洗涤3-4次，滤干即得固定化氨基酰化酶，备用。 AC-DL-Phe的制备：将DL-Phe、冰醋酸及醋酸酐按1：7：1的比例加入反应釜中，90℃反应4-5h，回收醋酸，浓缩液加一定量去离子水，再浓缩至一定体积，冷却结晶，滤取晶体于60℃真空干燥得Ac-DL-Phe。 酶水解：在1kL反应罐中加700L 0.1M Ac-DL-Phe钠盐溶液，搅拌下滴加6M HCl至pH6.7-7.0，加15-20kg固定化氨基酰化酶，50℃反应4-5h，过滤，滤液用于分离L-Phe，固定化酶可循环再用。 分离纯化：滤液用6M HCl调pH4.8-5.1，减压浓缩至35升，于0℃结晶；冷乙醇洗晶体三次，抽滤、烘干得粗品。结晶滤液中的Ac-D-Phe可消旋再转化。 精制：粗品 溶于100℃去离子水 活性炭脱色 热滤、滤液结 晶 冷乙醇洗涤抽干、烘干 母液可重结晶 Ac-D-Phe的消旋：将上述含有Ac-D-Phe的洗涤液和结晶母液合并、浓缩后缓缓加入醋酸干，在25-45℃搅拌反应30min，冷却至室温，放置6h后用弄盐酸调pH1.5-2.0，5℃结晶过夜，滤取结晶，用去离子水洗涤3-5次，抽干，40 ℃真空干燥即得Ac-D-Phe。用于拆分。 检验、作用与用途：（略） 4、化学合成法 （1）基本原理与过程： 以α-卤代羧酸、醛类、甘氨酸衍生物、异氰酸盐、乙酰氨基丙二酸二乙酯、卤代烃、 α-酮酸及某些氨基酸为原料，经氨解、水解、缩合、取代和氢化还原等化学反应合成α-氨基酸的方法称为氨基酸的化学合成法。有一般合成法和不对称合成法两大类，前者产物均为DL-型氨基酸，后者产物为L-型氨基酸。 （2）化学合成法生产的氨基酸品种和工艺： 目前采用此方法合成的氨基酸主要有Gly、DL-Met、DL-Ala，此外，尚有DL-Trp、L-Pro、L-Thr等。 下面主要介绍L-Pro和L-Thr的化学合成及分离纯化工艺》 L-Pro的制备： L-Pro的结构与性质：（略） 合成路线：L-Glu与乙醇缩合成L-谷氨酸-γ-乙酯，后者经硼氢化钾还原即得L-Pro。 工艺路线： 工艺过程： L-谷氨酸的酯化：无水乙醇100L与L-Glu 15kg投入200L反应罐中，冷却至0℃，搅拌下滴加浓硫酸8.1L， 0℃搅拌反应1h，再升温至25℃搅拌1h，加三乙胺至pH8.0-8.5，搅拌1h，产生白色沉淀。降温至5℃过滤。沉淀用50L 95%乙醇洗涤，滤取沉淀，50℃真空干燥得L-谷氨酸-γ-乙酯。 L-谷氨酸-γ-乙酯的还原：用KBH4还原，即得L-Pro粗品。 沉淀：粗品溶于去离子水中，用五氯酚乙醇溶液沉淀，过滤、冰水洗涤，抽干、100℃烘干得复盐。 解析与精制：上述滤液加3%氨水20L，搅拌7-8h，冷至0℃过滤，沉淀用少量冰水洗涤，抽干。合并洗液和滤液，减压浓缩近干，加10L去离子水溶解、过滤；滤液用活性炭脱色、过滤，滤液用乙醚萃取，水层浓缩至干，无水乙