有关物质检查常见问题的探讨.pptVIP

头孢曲松钠的流动相原来0.8%四庚基溴化铵乙腈溶液-水-磷酸盐缓冲液-枸橼酸缓冲液（500：440：55：5），由4种成分组成，需配制3种缓冲液； 后改为0.02mol/L正辛胺溶液-乙腈（73：27），用磷酸调节pH值为6.5，仅由2种成分组成 流动相的选择 分离能力的考察 -粗产品溶液或配制各种杂质混合物 （起始原料，中间体，副产物） - 强制降解 （酸、碱、光、热、氧化） 二、HPLC方法的建立与验证 强制降解的考察方法误区： （酸、碱、光、热、氧化） - 破坏条件过于强烈 （控制在主成分降低10%~20%为宜） - 中和方法 - 目的不明确，结论不正确 分离能力的考察 二、HPLC方法的建立与验证 - 不规定柱温 （不需加温且对温度不敏感） - 25℃或30 ℃ （不需加温但对温度敏感，需保持恒温） - 35 ℃～70 ℃ （需加温且对温度敏感，需保持恒温） 作为耐用性试验之一 且可与溶液稳定性同时进行 柱温的确定 溶液的配制 需要注意的几点： - 需否避光？ - 可否超声、加热、多久？过滤？滤材？ - 浓度与线性范围和检测限是否匹配？ 弃20ml初滤液？用xx膜过滤？ 用聚四氟酰胺小瓶？ 机械振摇xx分钟等等？ 二、HPLC方法的建立与验证 - 常用10μl～100μl -过低误差大，影响重现性 -太多过载，影响峰形与分离 - 配合溶液浓度保证检测灵敏度 进样体积的确定 色谱系统的适用性试验 - 指标的应用 -分离度的保证 -灵敏度的测试 - 精密度的要求 Company Logo 系统适用性试验要求 重复性 理论板数 分离度 保留时间 拖尾因子 常用指标 分离度指标性物质的选择 - 难分离物质对 - 最常出现的杂质 - 单独规定限度的特定杂质 - 结构性质相近且 不干扰测定的物质 二、HPLC方法的建立与验证 -准确定量分析时通常两峰间R≥1.5 -峰高峰谷比 分离度的要求 拖尾因子（T）的要求与应用 为保证分离效果和测量精度用于评价色谱峰对称性 的指标 T=W0.05h/2d1 式中W0.05h 为5％峰高处的峰宽； d1 为5％峰高出峰顶点至峰前沿 之间的距离 除另有规定外，峰高法定量时 T 应在0.95～1.05 之间。 峰面积法测定时，若拖尾严重，将 影响峰面积的准确测量。峰前峰后有 紧邻杂质峰时，对拖尾因子作出规定。 重复性（RSD）的要求 用于评价连续进样后，色谱系统响应值的重复性能。采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5 次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%；采用内标法时，通常配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3 种不同浓度的溶液，分别至少进样2 次，计算平均校正因子。其相对标准偏差应不大于2.0% 在质量标准中如果没有明确规定，就是≤2.0% Company Logo 特定杂质峰定位的方法 杂质对照品 混合对照品 临时降解 相对保留时间+参考图 峰定位 方法的验证 验证 定量 限度 - 准确度 + - -精密度 + - 重复性 + - 中间精密度 （+ ） - -专属性 + + - 检测限 （+ ） + - 定量限 + - - 线性范围 + - -耐用性 + + Company Logo 杂质含量的计算 对照品 外标法 主成分自 身对照法 加校正因 子的自身 对照法 面积归一化法 对照品外标法 优点 缺点 50% 定位 方便 定量准确 要求严 费用 高 70% 有条件时首选的方法 主成分自身对照法 优点 缺点 50% 不需 定位 费用低 定量 粗 70% 没条件时首选的方法 加校正因子的主成分自身对照法 优点 缺点 50% 定位 方便 定量较 准确 需测定因子 定位难 70% 杂质与主成分响应因子差异大（超过0.9~1.1 ） 且对照品昂贵时选用的方法 面积归一化法 优点 缺点 50% 不需 定位 费用低 定量粗 70% 不提倡使用的方法 影响多 重复性差 Company