非激动剂PPARγ配体的筛选方法建立和应用环奕彭军王悦贾春明.PDF

激动剂PPAR 配体的筛选方法建立和应用 环奕，彭军，王悦，贾春明，王克，王克华，冯志强，申竹芳* ( 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所, 天然药物活性物质与功能国家重 点实验室, 北京 100050) 摘要: 建立体外活性评价方法考察化合物对过氧化物酶体增 物激活受体 （peroxisome proliferator-activated receptor , PPAR ）转录激活活性和结合活性。 首先通过质粒构建，分别建立PPAR 反应原件 （PPAR response element, PPRE ） 介导报告基因表达的转录激活筛选方法，以及PPAR 配体结合区（ligand binding domain, LBD ）与酵母转录激活因子Gal4 组成的嵌合受体在细胞水平的结合活性 筛选方法。并采用基于时间分辨-荧光共振能量转移 （time resolved-fluorescence resonance energy transfer, TR-FRET ）技术的PPAR 竞争性结合检测方法，考察化 合物或药物对PPAR 的亲和力。采用以上3 种不同的体外活性评价方法，评价 不同 PPAR 配体的效能和作用特点，并发现了一个新的苯磺酰胺衍生化合物， ZLJ01，具有类似于已知PPAR 激动剂的结合活性和亲和力，但无PPRE 介导的 转录激活活性。初步体外降糖活性检测发现其可促进肝细胞胰岛素依赖的葡萄糖 摄取。综上所述，结合转录激活活性和亲和力的评价方法， 用于筛选非激动剂 PPAR 配体，以发现新型PPAR 调节剂。 关键词：过氧化物酶体增 物激活受体 ；激动剂；配体；转录激活；结合 活性；亲和力 中图分类号：R943 文献标识码： A 文章编号：0513-4870(2014) 11 Establishment and application of screening methods for non-agonist PPAR ligand HUAN Yi, PENG Jun, WANG Yue, JIA Chun-ming, WANG Ke, WANG Ke-hua, FENG Zhi-qiang, SHEN Zhu-fang* 收稿日期：20 14-06-04 ；修回日期：20 14-09-10 基金项目：国家新药创制重大专项基金（20 12ZX0930 1002-004 ），中央级公益性科研院所基本科研业务费 专项基金（20 13CHX 18） *通讯作者：Tel: 010 E-mail: shenzhf@imm.ac.cn 1 / 14 (State Key Laboratory of Bioactive Substances and Functions of Natural Medicines, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Science Peking Union Medical College, Beijing 100050, China) Abstract: In-vitro assay methods were established to evaluate transactivation and binding activity of compounds on peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR ). Firstly, plasmids were constructed for transactivation assay of PPAR response element (PPRE) triggered reporter gene express