蛋白质的分离与鉴定-长沙医学院.doc

教 案 2012 ~ 2013 学年第 1 学期 课 程 名 称 生物化学 开 课 系 部 基础医学系 开 课 教 研 室 生物化学 授 课 教 师 赵娟 职 称 助教 授 课 班 级 2010级生物技术 学 生 人 数 29 长 沙 医 学 院 教 务 处 制 长 沙 医 学 院 教 案 课程名称 生物化学 授课题目（章节或主题） 蛋白质蛋白质的分离与鉴定 授课教师 赵娟 所属系（部） 基础医学系 所属教研室 生物技术 职称 助教 授课时间 2012 年 09 月03日第 1周星期2 授课时数 2学时 授课班级 生物技术 专业（本科 eq \o\ac(□,√) 专科□） 2010 级 1 班 教学课型 理论课 eq \o\ac(□,√) 实验课□ 见习课□ 习题课□ 讨论课□ 其它□ 教材名称、作者、出版社及出版时间 生物化学，刘国琴等，中国农大出版社，2011 教学目的要求： 　1．掌握蛋白质主要的分离原理及方法 　2．了解蛋白质的鉴定方法 重点与难点： 重点：蛋白质主要的分离原理 难点：蛋白质主要的分离原理 教学方法（请打√选择）： 讲授法 eq \o\ac(□,√) 讨论法□ 启发式 eq \o\ac(□,√) 自学辅导法□ 练习法(习题或操作) 读书指导法□ ＰＢＬ（以问题为中心的教学法）□ 其他□ 教学手段（请打√选择）： 板书 eq \o\ac(□,√) 实物□ 标本□ 挂图□ 模型□ 投影□ 幻灯 eq \o\ac(□,√) 录像□ CAI（计算机辅助教学）□ 教学过程设计和教学内容：多媒体教学，讲授法、启发式提问法 教学内容： 第一节 蛋白质的分离纯化 一、蛋白质分离提纯的一般原则 重点归纳：高纯度、高活性、高回收率 二、蛋白质的分离方法 （一）根据分子大小不同的分离方法 透析（dialysis）和超滤（ultrafiltration） 密度梯度离心（density gradient ultracentrifugation） 凝胶过滤（filtration chromatography） 先图示介绍凝胶过滤原理，再投影进行概括。 强调“大分子先于小分子被洗脱” （二）利用溶解度差别的分离方法 等电沉淀 盐溶与盐析 有机溶剂分离法 4、温度对蛋白质溶解度的影响 （三）根据电荷不同的分离方法(重点讲授) 电泳（electrophoresis） 大多学生尚未接触过此类仪器。要结合图示讲授。 a.自由电泳（移动界面电泳） moving-boundary electrophoresis b.区带电泳 zone electrophoresis 迁移率＝某一蛋白条带移动距离/前沿到达距离 c.不连续电泳 discontinuous electrophoresis 凝胶孔径、缓冲液、pH 不连续。 三种效应：浓缩效应、分子筛效应、电荷效应 强调电泳迁移率与蛋白质分子量、分子形状、电荷数量及性质有关。因为蛋白质尚未变性，有时又交活性电泳或非变性电泳。 d.等电聚焦电泳isoelectric focusing electrophoresis（IFE） 蛋白质在具有pH梯度的介质中进行分离。在电场中，每种蛋白质成分将移向并停留在等于其等电点的pH处，形成一个很窄的区带。 用途：按等电点分离蛋白质；鉴定蛋白质等电点。 2.离子交换柱层析 纤维素离子交换剂（cellulose ion exchanger） 葡聚糖离子交换剂（Sephadex ion exchanger） 电荷、分子筛 这里强调大分子对介质的特殊要求，不同于氨基酸的离子交换柱层析。 （四）根据蛋白质的吸附特性分离 羟基磷灰石 活性碳 硅胶 氧化铝 （五）亲和层析（afinity chromatography） 利用蛋白质所具有的生物学特异性，通过与特异配基专一、可逆结合（非共价结合）分离蛋白质的一种层析方法。优点：高效、高纯 这里可介绍一些新技术。近年来化学工程用于亲和柱的制备，增加了亲和层析的应用范围。如各种ATP亲和柱，区别是配体与介质的连接位点。Ni-柱等. 第二节蛋白质的测定 一、蛋白质分子量的