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植物组织培养脱毒技术进展研究 主讲人： 小组成员：邱智海，史丽丽，王 珍，熊化鑫，徐德贵， 徐小金，鄢惠庆，杨 林，余欢，曾国敏 组织培养脱毒 植物组织培养常用脱毒方法 病毒抑制剂 无病毒植株检测 分子生物学法 展望 脱毒甘蔗 脱毒草莓 脱毒工作室 超低温 脱毒技术的发展过程与应用 酶联免疫吸附法 茎尖脱毒法 脱毒率 高温处理 脱毒技术的发展过程 1 脱毒技术的未来 4 无病毒植株检测方法 3 常用的脱毒技术 2 茎尖大小和脱毒率 热处理 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 抗病毒化学药剂 超低温保存 返回 原理：利用抗病毒化学药剂来抑制病毒核酸与蛋白质的合成或是改变寄主的代谢方式 化学抗病毒试剂：9-（2-羟二氧）甲基鸟嘌呤，2-硫尿嘧啶，叠氮胸苷，2,4-氧六氢三氮杂苯（DHT）和类似嘌呤碱基代谢物质三氮唑核苷（病毒唑） 优点：与茎尖培养相结合，可较容易脱去多种病毒，而且此法对取材要求不严，接种茎尖可大于1mm，易于分化出苗，提高成活率 缺点：不能脱去所有病毒，尚不能完全抑制病毒使其失活 2 3 1 返回 1.酶联免疫吸附反应（ELISA） 2.分子生物学法 脱毒后的无病毒植株须经严格的病毒鉴定和检测证明确属无毒良种种源，并采取严密的防病毒重复污染措施才能取得预期效果 建立快速，高灵敏度，高通量的病毒检测体系是病毒害预防和综合防治的先决条件 1.核酸杂交技术； 2.RT-PCR； 3.荧光定量PCR； 4.DNA微阵列技术 特异性强，灵敏度高，而且不需要准备抗血清以及放射性探针，操作简单，适用广泛，是植物病毒检测的重要方法 返回 现有的脱毒技术多种多样，各有优缺 点，目前应用的趋势是将不同的方法 结合起来，从而阻止植物病毒的扩散 如采用茎尖培养和热处理都不能除去 悬钩子丛矮病毒（RBDV），若热处 后，再采用茎尖玻璃化超低温保存， 存活的植株中35%无该病毒 返回 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 单击此处添加段落文字内容 返回 此处添加内容 此处添加内容 此处添加内容 此处添加内容 此处添加内容 此处添加内容 此处添加内容 此处添加内容 返回 文字内容 文字内容 文字内容 单击此处添加 段落文字内容 单击此处添加 段落文字内容 单击此处添加 段落文字内容 单击此处添加 段落文字内容 返回 优点 无需昂贵仪器或设备 出无毒苗所需时间短 植株再生后无毒 去除原菌感染 存活率，再生率和脱毒率高 意义：超低温保存是种资源长久保存的理想方法，在液氮中亦可保证材料的遗传稳定性. 原理：在冰冻和冻融期间，细胞的结构和功能受损严重，含有病毒的顶端细胞液泡较大，水分多，易形成冰晶而致死，分生组织含水分少，胞质浓，不易被冻死 返回 自1952年法国莫勒尔使用生长点培养法获得无病毒植株后，该种脱毒技术被广泛使用。通过脱毒，使植株恢复种性，增强抗性，生长健壮，光合作用增强，明显提高了植株的产量和品质。尤其是该技术在马铃薯和甘薯上的应用，对其种植逐步走向规模化，标准化，区域化具有重要意义。 返回 优缺点 原理 ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 优点：由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 缺点：需要制备抗体，而且一次只能检测一种病毒。 返回 指示植物鉴定：a.摩擦接种法 b.嫁接法 原理：病毒在寄主植物内靠维管系统运输，茎尖分生组织中未形成维管束，所以病毒的运动受阻，所以茎尖组织中不含或只含低浓度病毒 依据：　病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒 技术关键：1.被脱毒植物携带病毒的诊断及其在体内的分