分子生物学基础及分子病理串讲V3.pptx

分子生物学基础及分子病理串讲;u 分子基础概念 u 基因变异 u 分子病理检测技术 u 信号通路 ;;DNA VS RNA;;肺癌朗清TM;分子基础小结;u 分子基础概念 u 基因变异 u 分子病理检测技术 u 信号通路 ;前文提及：DNA携带了全套遗传信息，很稳定；但是总难免有差错的时候，基因的DNA片段某个地方序列发生变化，和原来的DNA不同了，这就是基因变异。;基因变异有哪些类型？;基因变异有哪些类型？;体细胞突变与胚系突变？;我们主要需要了解的几种变异类型包括：点突变（L858R、T790M）、插入/缺失（19Del）、拷贝数变异（扩增、缺失）（MET基因扩增）、 融合 （ALK、ROS1以及RET）； 分清体细胞突变（Somatic Mutation即肿瘤细胞特有的基因变异，可用来做个体化用药指导），胚系突变（Germline Mutation即有父母遗传来的基因变异，可用来做肿瘤易感性检测）； ;u 分子基础概念 u 基因变异 u 分子病理检测技术 u 信号通路 ;HE染色——判定细胞形态与病理诊断;HE染色——判定细胞形态与病理诊断;HE染色——判定细胞形态与病理诊断;HE染色——判定细胞形态与病理诊断;应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行分型、定位、定性及定量的检测。;;设计扩增引物的同时，加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。 ;用不同的荧光素标记四种碱基，采用双脱氧末端终止测序法，通过采集荧光信号来检测DNA序列，进而对DNA的点突变、插入、缺失进行检测;二代测序——NGS;u 分子基础概念 u 基因变异 u 分子病理检测技术 u 信号通路 ;信号通路是什么？;信号通路有很多，参与到了细胞的生殖，生长，分化，凋亡，新陈代谢等各个方面， 如果信号通路出现问题，细胞就会不受控制乱来 ； 对于肿瘤发生及癌症治疗，MAPK信号通路是最主要的信号通路之一，主要包括EGFR-RAS-BRAF-MEK-ERK ； ;Thanks for your attention;DNA和RNA有什么区别，分别有什么作用？ DNA：脱氧核糖核酸，RNA：核糖核酸；DNA：双链结构，RNA:单链结构；DNA：包含内含子和外显子；成熟的RNA仅包含外显子区；DNA的作用是保存遗传信息，转录RNA；RNA的作用是作为翻译蛋白质的模板，并调节基因的翻译与表达。 你认为临床上DNA样本好操作还是RNA样本好操作，为什么？ DNA好操作，DNA的双链结构相对于RNA的单链结构更稳定，而起RNA容易被环境中的RNA酶分解，对实验严要求较高，因此DNA容易操作 中心法则是什么意思？ ;基因变异主要有四种类型（点突变）、（插入/缺失）、（拷贝数变异（扩增、缺失））和（重排（融合））； 探针是否需要完全匹配才能和目的DNA杂交？（ 不需要 ） PCR的作用是什么？ 作用是使微量目的DNA片段特异性扩增，脱颖而出，富集起来，以供研究， 检测肿瘤： 富集癌症发生、用药相关的基因，检测基因的点突变，小的插入、 缺失。 一个模板DNA分子，经过5轮PCR后，理论上能获得多少DNA？25或者32； 信号通路激活的第一步是细胞外的（信号配体）与细胞膜上的（受体）相结合； MAPK信号通路核心分子从上游到下游是（EGFR)、RAS、（RAF）、MEK、 ERK等； 人类基因组有（2万）多个基因；;体细胞突变和胚系突变有什么不同？ 体细胞突变是人身体的体细胞发生的变异，这种变异是后天的，且在不同部位 发生的变异往往不一样，因此检测体细胞变异需要就地取材。我们可以狭义的 认为体细胞突变是肿瘤细胞才有的特异突变，正常细胞是没有的。胚系突变是 出生时已经携带突变，是由父母遗传来的，全身所有正常细胞携带突变一样??? 因此可以取包括血液、唾液等样品检测。