重组DNA技术的操作过程.ppt

杂交探针的标记：ABC显色酶标记 GCTTGAGCAGTAACCTG 显色酶 Biotin 生物素 Avidin 生物素结合蛋白 烷烃连接臂 生色底物 颜色产物 基于克隆DNA序列检测 菌落噬菌斑原位杂交法 杂交探针的标记：地高辛系统标记 dUTP-连接臂-甾醇半抗原 digoxigenin DIG 抗体-显色酶交联复合物 基于克隆DNA序列检测 菌落噬菌斑原位杂交法 基于克隆DNA序列检测 DNA序列分析法 双脱氧末端终止测序法的基本原理： DNA序列测定是精确鉴定目的基因的重要手段，目前国际上流行采用Sanger发明的双脱氧末端终止法测定DNA序列，其工作原理是在DNA聚合反应的进程中，通过位点特异性终止测定DNA序列其关键技术有： DNA链聚合反应时的定点随机中断（ddNTP） 聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨率（600 bp / 601 bp） 电脑自动检测、记录、编辑程序 用于DNA测序的专一性试剂盒（Kit） 基于克隆DNA序列检测 DNA序列分析法 双脱氧末端终止测序法的基本操作： A C G T ssDNA ssDNA ssDNA ssDNA Primer Primer Primer Primer Klenow Klenow Klenow Klenow dNTPs dNTPs dNTPs dNTPs ddATP ddCTP