4.11植物组织培养.ppt

第四部分浅尝现代生物技术 实验11 植物的组织培养 .植物组织培养的概念 .植物组织培养过程中激素的摩尔浓度 比对细胞分化的影响 .本实验内容 .培养基 .操作步骤 .思考与练习 一、植物组织培养 取一部分植物组织，如叶、芽、茎等，在无菌的条件下接种在琼脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽，培养为完整植株的技术。 细胞分裂素／生长素 结果 比例高 比例大致相等 比例低 二、植物组织培养过程中激素的摩尔浓度 比对细胞分化的影响（再分化过程） 诱导_________生成 愈伤组织继续生长而不分化 诱导长_________ 芽 根 不一定为[CTK] ＞ [IAA] ，而是相对于某一适宜值而言。下同 外植体 愈伤组织 脱分化 再分化 芽、根 植株 三、本实验内容 草炭土 草炭土即泥炭，是一种经过几千年所形成的天然沼泽地产物，由沼泽植物的残体，在多水的嫌气条件下， 不能完全分解堆积而成。含有大量水分和未被彻底分解的植物残体、腐殖质以及一部分矿物质。 四、培养基及发芽和生根培养基 MS培养基 大量元素 mg/L 微量元素 mg/L 微量元素 mg/L 有机成分 mg/L NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 1,650 1,900 400 370 170 KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O 0.83 6.2 22.3 8.6 0.025 CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O Na2-EDTA FeSO4·7H2O 蔗糖（g/L） 0.025 0.025 37.3 27.8 30 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 盐酸硫胺素 甘氨酸 100 0.5 0.5 0.1 2.0 微量元素 大量元素 有机成分 C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 MS培养基中添加相应植物激素，可配成发芽培养基或生根培养基 是目前使用最普遍的培养基。由大量元素、微量元素、有机成分组成 也可将三类成分分别配成浓度为配方的5～10倍的母液。 用人工合成的激素类似物（植物生长调节剂）代替植物激素 萘乙酸（NAA）溶液替代生长素（IAA） 苄基腺嘌呤（BA）溶液替代细胞分裂素（CTK） 萘乙酸用少量0.1mol/L NaOH溶解 苄基腺嘌呤用少量0.1mol/L HCl溶解 发芽培养基 MS培养基3000mL+含1.5mgBA溶液+含0.02mgNAA溶液+30g蔗糖+40g琼脂，定溶4000mL，分装100瓶，1kg压力灭菌20min 生根培养基 MS培养基1000mL+含0.38mgNAA液+30g蔗糖+20g琼脂，定溶2000mL，分装50瓶，灭菌 菊花在丛状苗阶段能自身产生细胞分裂素，生根本身需要CTK少。故此生根培养基可以不加BA 五、实验步骤 本实验步骤： 一般步骤 外植体的选取和消毒 接种 生芽 炼苗 移 栽 日光灯下18~25℃培养，每天光照不少于14.5小时 生 根 1.外植体的选取和消毒 本实验：无菌培养的菊花幼苗 也可：自然生长的菊花茎段 取幼茎的切段，每段至少有1张叶片 自然生长的幼茎切段 70%乙醇浸泡 5%次氯酸钠溶液浸泡 5%次氯酸钠溶液浸泡 无菌水清洗 5min 5min 10min 利用茎段可直接进行生芽培养，不需要经过愈伤组织阶段，但切口处能发生脱分化过程，形成愈伤组织 2.接种 将茎段直接接种于生芽培养基中（无菌操作） 每瓶可接1个或者2~3个茎段 3.生芽培养 生芽培养基培养 2~3周后，长出健壮的丛状苗 丛状苗 4.生根培养 分株后，移植入生根培养基培养 对丛状苗进行切割分株（无菌操作） 5.炼苗 苗移至草炭土或蛭石中 用玻璃罩或塑料布保持80%以上湿度，2~3天后逐渐打开玻璃罩，降低湿度到自然湿度下为止 使试管苗逐渐适应大田土栽环境 6.定植栽培 移至大田土壤栽培 实例：兰花的组培 1. 不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？ 2. 本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？ 任何植物种或品种都不可贸然使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度，都要探索使用何种合成激素和何种激素浓度才成。 天然植物激素在植物体内均有使之分解的酶，因此在植物体内作用和存在的时间就很短。而人工合成激素在植物中没有使之分解的酶，所以在植物体内存在和作用的时间长，作用效果明显。 思考与练习 3. 如果在自然界取植物样本进行组织培养，你认为应该采取什么措施保证样本不被污染？ ①操作环境洁净。超净台、所有暴露的操作要在酒精灯火焰旁进行