第2-3章植物组织与器官培养.ppt

举例： 水母雪莲毛状根培 养生产黄酮类化合物 雪 莲 吉祥如意、圣洁之物 ? ? 雪莲被视为神物。饮过苞叶上的露珠水滴, 则认为可以驱邪除病,延年益寿。 高山牧民在行路途中遇到雪莲时,被认为有 吉祥如意的征兆,并以圣洁之物相待。 雪莲，别名雪荷花.主要生长于天山南北坡，阿尔泰 山及昆仑山雪线附近的高旱冰碛地带的悬崖峭壁之 上。3000-5000M海拔以上。我国新疆著名特产。 雪 莲 ? ? ? 雪莲中主要成分为黄酮类化合物，具有止咳祛痰、抗炎镇痛、治疗偏瘫、护肝解毒、治疗肝炎/肝硬化、抗癌、延缓衰老等功效。 雪莲药用价值 水母雪莲(Saussures medusa)属菊科凤毛菊属雪兔子亚属植物。 雪莲在医药上应用以有数百年的历史。汉族人民多视为治疗风湿关节炎之珍品;维吾尔、哈萨克族则当作妇科良药。 水母雪莲毛状根培养生产黄酮 自然资源有限，生长条件苛刻，很难人工栽培。 因此通过水母雪莲细胞培养生产黄酮 有着重要意义。 Summary in Plant Tissues Culture * 冠瘿碱位于T-DNA区，作用是为发根农杆菌提供唯一的碳源和氮源营养供其利用。 ① 生长素 (auxin) ? 生长素是由色氨酸通过一系列中间产物形成的。 ? 在植物组织培养器官和整株水平中，生长素主要用来刺激细胞分 裂和诱导根的分化。 ? 常用的生长素有：吲哚乙酸（IAA）、2，4-二氯苯氧乙 酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）等。 IAA活力较弱。NAA起动能力要比IAA高出3-4倍。IBA是促 进发根能力较强的生长调节物质。NAA和IBA广泛用于生 根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。 2，4—D起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的 形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成。 ② 细胞分裂素（Cytokinin） ? 细胞分裂素大多是嘌呤族衍生物，自然状态下分裂素主 要在根中形成，茎端、萌发中的种子、发育中的果实和 种子也能合成分裂素。 ? 分裂素的生理作用主要是诱导芽的分化、促进侧芽萌发生 长、促进细胞分裂与扩大。多用于诱导不定芽的分化和 茎、苗的增殖，而在生根培养时使用较少或用量较低。 ? 主要有激动素（KT）、6-苄基腺嘌呤（6-BA）和玉米素 （ZT）等。其中最常用的是6—苄基腺嘌呤（6—BA）。其中ZT活性最强，但昂贵。 高 有利于根的形成和愈伤组织 的形成 适中 低 有利于根芽的分化 有利于芽的形成 1956年，米勒（Miller）与斯库格（Skoog）一起 提出了植物激素控制器官形成的观点。 生长素/细胞分裂素 能促进茎的延长、发芽、种子休眠、开花、性别表现等过程。 一般情况下，离体培养的细胞合成的赤霉素能满足自身需要， 故常无需添加。若需要添加，常用GA3。 ③ 赤霉素 ④ 激素配比 3.1.3.4 常用培养基 ? 富盐平衡培养基：是目前使用最广泛的一类，代表性的培养基有MS、 LS、BL、BM、ER等。特点是：无机盐浓度高，微量元素种类齐全，浓度高；元素间比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲能力、稳定性好、营养丰富。 ? 高硝态氮培养基：代表性培养基有B5（豆类、木本植物）、N6（单子叶植物和花药培养）、SH。特点是：硝酸钾浓度高，氨态氮浓度低，含有较高浓度的硫胺素（VB1）。 ? 中盐培养基：代表性培养基有Nitsch、Miller、Blaydes、H。大多是在MS培养基基础上进行改良设计。特点是：大量元素、无机盐为MS的一半，微量元素种类减少、含量增高。维生素种类比MS增多，例如增加了生物素、叶酸等。 ? 低盐培养基：代表性培养基有 White（根、胚）、WS、HE、HB。特点是：无机盐、有机成分含量浓度低，多用作生根培养的培养基。 见P42附录表 例：MS培养基贮备液（母液）的配制 贮备液 成分 培养基中用量 （mg/L） 20×贮备液中含量 （mg/L） Ⅰ 大量元素 NH4NO3 1650 33000 KNO3 1900 38000 CaCl2·2H2O 或CaCl2 440 或330 8800 或6645 MgSO4·7H2O 370 7400 KH2PO4 170 3400 贮备液 成分 培养基中用量 （mg/L） 200×贮备液中含量 （mg/L） Ⅱ 微量元素 KI 0.83 166 H3BO3 6.2 1240 MnSO4·7H2O 22.3 4460 ZnSO4·7H2O 8.6 1720 Na2MoO4·2H2O 0.25 50 CuSO4·5H2O 0.025 5 CoCl2·6H2O 0.025 5 贮备液 成分 培养基中用量 （mg/L） 200×贮备液中含量 （