东北农业大学大豆研究所生物技术应用研究进展情况讲义.ppt

图1 大豆总的RNA提取图谱 1：未诱导样本的总RNA 2：诱导样本的总RNA 由图可知,提取的总RNA完整无降解,适合下一步操作。 大豆8143总RNA的提取结果 5.2 研究结果 1 2 大豆8143的mRNA纯化结果 图2 大豆mRNA的纯化图谱 1：未诱导样本的mRNA 2：诱导后样本的mRNA 纯化的mRNA在琼脂糖凝胶电泳上为弥散状, 紫外分光光度计检测Ａ260/Ａ280接近2.0,证明polyA 质量较好 大豆8143诱导前后的双链cDNA合成结果 图3 cDNA二链合成图谱 1：未诱导样本的driver cDNA 2：诱导后样本的tester cDNA 1 2 M 酶切结果分析 图4 cDNA酶切图谱 1：未经酶切的tester cDNA 2：酶切后的tester cDNA 对合成的tester cDNA双链用RsaⅠ酶切,由图可见酶切后的片段小于未酶切的tester cDNA片段,酶切效果较好,可用于下一步接头连接。 1 2 M 差异表达消减效率分析 图5 消减后PCR扩增图谱 1：差减样本的第一次PCR结果 2：未差减样本的第一次PCR结果 3：差减样本的第二次PCR结果 4：未差减样本的第二次PCR结果 由图分析可知,抑制消减杂交有效富集了诱导后大豆8143差异表达的cDNA片段 1 2 3 4 M 连接转化与质粒文库滴度计算 上：转化后大肠杆菌DH5α在100mg/ml Amp的LB培养基的生长 下左：未转化的DH5α在100mg/ml Amp的LB培养基的生长 下右：未化的DH5α在无Amp的LB培养基的生长 序列测定 挑取阳性克隆随机送交测序——64个 ESTs片段中最短的为136bp，最长的691bp，平均长度为456bp，有41条序列带有poly（A） 将测序结果到GenBank进行Blastn和Blastx比对，其中49个有比较明确的比对结果 相关功能 细胞保护机制 过氧化氢酶 锰超氧化物歧化酶 抑制病原菌生长或昆虫发育 枯草杆菌蛋白酶抑制因子 半胱氨酸蛋白酶抑制因子 系统获得性抗性相关 热激蛋白 侣伴蛋白 细胞色素b5还原酶 伸展蛋白 二氢叶酸还原酶 查尔酮合成酶 RNA结合蛋白 丝氨酸蛋白酶 延伸因子1A 水通道蛋白 可变表面抗原蛋白 铝诱导蛋白 同源基因种类 表达谱分析 相关功能 信号传导相关 胞质磷酸甘油酸激酶1 传感组氨酸激酶 Ca+传感接受元件 β转化生长因子Ⅰ型受体 离子通道调控蛋白 富含羟脯胺酸糖蛋白 生长素下调蛋白12-2 持家基因 与蛋白质合成相关 参与呼吸链 参与光合作用 与有丝分裂有关 功能不确切 硫胺素合成酶 包膜突起蛋白 酰基载体蛋白硫脂酶 硫酸盐类糖蛋白 同源基因种类 表达谱分析 六、大豆功能基因转化研究 抗牛巴氏杆菌性肺炎疫苗基因对大豆遗传转化的研究  实验材料  植物材料 选用11个 全国不同积温带的大豆主栽品种作为本研究的试材,有合丰25、合丰35、黑农35、黑农42、东农42、东农163、黑河99-1201、绥农10、绥农14、吉林21、辽豆1号 质粒与根癌农杆菌菌株 LBA4404、AGL1和EHA101 七、大豆资源分析 7.1 大豆灰斑病种质资源遗传多样性的RAPD和SSR分析 研究材料和方法 94份大豆灰斑病抗病种质资源的品种品系 RAPD、SSR（AGE PAGE） 统计分析 7.2 研究结果 根据大豆灰斑病种质资源10个生理小种的抗感鉴定结果与RAPD和SSR的分子数据，得到了许多与各生理小种专化抗性有关的分子标记 黑龙江省大豆灰斑病种质资源的遗传基础狭窄，急需拓宽，以育出抗性更强、抗谱更广、抗病更持久的品种 新的遗传相似系数的提出 Chen Qingshans coefficient(CHEN)： Ccij=2(a+d)/(2(a+d)+b+c) Sorensens coefficient (SOREN)： Scij=2a/(2a+b+c) Jaccards coefficient (JACCA)： Jcij= a/(a+b+c) Simple matching coefficient (MATCH)： SMcij=(a+d)/( a+b+c+d) Yule coeffic