第八章-基因工程菌苗.pptxVIP

第八章 基因工程菌苗;第一节 概述;1883年-1885年巴斯德（Pasteur）用理化和生物学方法制备了减毒的炭疽菌苗和狂犬疫苗等。 19世纪以来用菌苗免疫人畜，明显减少了传染病的发生。其中比较成功的是破伤风、白喉类毒素疫苗的应用，其效果可达95%以上。在发达国家破伤风、白喉、百日咳、嗜血性流感的发病率明显降低。抗菌药物的发明和应用，使临床常见的细菌性感染和病死率大幅下降。 ;细菌一旦获得耐药性，存在与细菌染色体、质粒和转座子中的耐药基因就可通过转化、转导、接合和转座等方式，将抗性基因传播到其他敏感菌，使之成为抗药菌株，给临床传染病的治疗带来困难。据WHO2014年报告，全球每年死亡约5800万人，其中30%，约1700万死于传染病。;在过去20年中，有29种新传染病出现。美国Satcher博士在Emerging Infectious Diseases杂志创刊刊号列出自1973年以来鉴定的主要传染病或病原体22种。近年鉴定的新病原体和疾病鉴定年份依次列于下表。;新鉴定的病原体 ;1982 ;1993;新病原体不断出现与鉴定，新的疫苗研制也相继开始。 重要病原体全基因测序的开展和完成，及类似生物表型的不同菌属间的同源序列和异源序列的发现，对抗感染研究来说，像进行了一场革命，不仅会促进病原体致病和发病机制的研究，也会开阔和调整菌苗研究的策略和思路。 目前已完成500余种病原菌的全基因测序，关于重要病原菌全基因测序进展情况列于下表。 ;完成的;E.coli K12; 总之，已控制传染病的再现及新传染病的出现，已引起全球的注意，对传染病威胁需要再认识，已有共识。因此，有必要加快进行创新性的细菌菌苗的研制与开发。 ;第二节 目前应用的菌苗及 其存在问题 ;按菌苗所含的成份，菌苗可分为三类， 减毒的活菌苗 灭活的死菌苗 纯化的多糖或蛋白成份苗 ;目前应用的菌苗的类型; ; 菌苗 ; 菌苗 ; 菌苗 ;二、研制菌苗的新方法（New method of produce bacteria vaccine） 1、研制菌苗的新方法（new methods） 对细菌感染发病机制认识的深入及涉及许多病原体毒力决定簇如黏附素、侵袭素、荚膜多糖、脂多糖、毒素等编码基因及其产物的结构与功能的分析与鉴定，是不断设计和研制新型疫苗的重要基础。 针对不同的病原体致病特点和毒力决定簇的特点，发展和产生了不同的菌苗研制方法，得到不同类型的菌苗。 现将目前研制菌苗的新方法及可能的后选菌苗列于下表;目前研制菌苗的新方法及可能的候选菌苗 ; 4 ;2.目前菌苗存在的问题 （1）尽管疫苗免疫取得了巨大的成功，但小于5岁的婴幼儿每年死于传染病的数目仍然很高。如疟疾几种腹泻病等均无有效疫苗，虽然卡介苗（BCG）使用几十年了，甚至纳入WHO的计划免疫，但其效果波动很大0%-80%。因此急需安全有效的结核菌苗问世。 ;（2）与病毒相比： ①基因工程菌苗及细菌核酸苗报导明显为少。至今国际上还没有成功满意的重组细菌苗提供人群使用。关于细菌毒素的分子及其编码基因与调控机制都比较清楚，因此，有关毒素的基因工程菌苗的构建或载体构建等均无问题。 ②但细菌外膜上的其它结构如黏附分子，侵袭蛋白，鞭毛及脂多糖等分子结构十分复杂，编码基因多呈丛分布，如LPS的表达涉及近30个基因的级联反应，操作起来尚有困难。;（1）安全，遗传性状稳定，无毒性，无致癌性，无致畸变或致流产性。 （2）结构简单清楚，可生物降解，有生物相容性，与组织抗原无免疫学交叉反应。 （3）对各年龄组人群均有长时间的免疫保护作用。 （4）多价，有更大的覆盖面，最好一次性免疫。;（5）能口服，能有效诱导黏膜免疫。 （6）为大量人群应用，疫苗必须廉价。 （7）易于生产，储存及服务，不需冷藏。;第三节 重要细菌基因工程 苗的研究进展;现有传统菌苗对重要细菌感染性疾病存在的问题： ①现有菌苗保护效果不好； ②副反应大； ③难以培养的细菌； ④可诱发癌变，有严重后遗症； ⑤新出现的病原体或新变异病原菌。 ;霍乱是由革兰氏阴性霍乱弧菌引起的烈性传染病。 霍乱弧菌在小肠分泌霍乱毒素（CT）引起腹泻及其他症状。 已知有O抗原，毒素共调节菌毛（TCP），血凝素（HA），外膜蛋白（OMPs）等，及引起水样腹泻的霍乱毒素（CT）由AB5的六聚体构成。 霍乱产毒株ctxAB的5’端有一6kb的DNA，依次有20t,ace,orfu,cep和RS序列与ctxAB一起称为霍乱毒素元件（CTX）元件，可进行转移，与一种丝状噬菌体（CTXΦ）有关，而非产毒株没有这段DNA 。;据菌体抗原霍乱弧菌可分为200个以