甲基对硫磷水解酶基因的高效表达及酶活性分析-中国科学院武汉病毒.PDF

　2004 年 31 (6) 　　　　　　　　　　　　微 生 物 学 通 报 ·77 · 甲基对硫磷水解酶基因的高效表达及酶活性分析 刘璐璐 　周亚凤 　张治平 　刘 　虹 　张先恩3 ( 中国科学院武汉病毒研究所　武汉　430071) 摘要 : 假单胞菌 WBC23 的甲基对硫磷水解酶基因 mph 在大肠杆菌系统 AD494 (DE3) P pET32a ( + ) 中实现了高效可溶性融合表达。表达的重组酶能够有效地被亲合层析纯化。 酶学性质分析表明 , 重组酶对底物乙基对硫磷水解能力较野生酶相比有近 4 倍的提高 , 对 甲基对硫磷和杀螟松的水解活力无明显变化。以融合蛋白形式存在的重组酶在室温及4 ℃ 下的贮存稳定性明显优于野生型酶。 关键词 : 有机磷水解酶 , 硫氧还蛋白 , 融合表达 中图分类号: Q81411 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 025322654 (2004) 0620077206 Heterogenous Gene Expression of Methyl Parathion Hydrolase and Analysis of the Enzyme Activity LIU Lu2Lu 　ZHOU Ya2Feng 　ZHANG Zhi2Ping 　LIU Hong 　ZHANG Xian2En 3 ( Wuhan Institute of Virology , Chinese Academy of Sciences , Wuhan 430071) Abstract : Methyl parathion hydrolase (MPH , E1 coding gene mph from Pseudomonas sp1 WBC23 , isolat2 ed and identified by our lab , was successfully expressed in E1 coli AD494 (DE3) P pET32a ( + ) system as soluble fusion form at high level1 The recombinant MPH showed nearly 4～5 fold higher specific activity to parathion than the enzyme from Pseudomonas sp1 WBC231 In addition , the thermal stability of the recombinant enzyme was improved com2 paring with the wild type enzyme1 Key words : Organophosphorus degrading enzyme , Thioredoxin , Fusion expression 微生物能够降解有机磷农药[1～3 ] 。2001 年我们筛选出一株甲基对硫磷降解菌 , 命名 ( ) 假单胞菌 Pseudomonas sp 1 WBC23 , 它可以彻底降解甲基对硫磷 , 并以甲基对硫磷为 唯一碳源和氮源生长[4 ] , 所分离得到的甲基对硫磷水解酶 (Methyl parathion hydrolase , MPH , E1 还可以降解乙基对硫磷 , 杀螟松和毒死俾。该酶对甲基对硫磷水 解酶的比活性是对乙基对硫磷水解酶比活性的 1