菌种的传代与保藏.PPT

? 取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，接种至营养肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤置35~37℃培养22~24 h。 ? 取出培养物，接种至营养琼脂斜面于35～37℃培养22～24h，取出后仔细观察菌苔形态、有无杂菌、涂片、革兰氏染色镜检，呈典型菌落后，转种3 代即可应用。如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。 2 菌种的传代与保存 方法（1）： 菌斜面 菌斜面（保存） ? 　培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。标签上著名菌名及接种日期。至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。 ? 点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住管塞，拨开管塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。 ? 堵上管塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开棉塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。 ? 取出接种棒，在火焰旁将培养基管管塞堵上，然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。 ? 　将已接种毕的细菌管置35~37℃培养22~24小时，霉菌管一般置20~25℃霉菌培养箱内培养7日。取出后放人冰箱保存，一般 3个月转种一次。 斜面接种时的无菌操作(1)接种灭菌 (2)开启试管塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好试管塞 方法2：菌斜面 营养肉汤 分离平板 菌斜面 如果菌落形态不典型可纯化，按下列方法传代（分离菌落） ： 用接种环取上述菌管（斜面）菌苔少许接种置营养肉汤中(已灭菌), 置35~37℃培养18~24小时后，再用接种环取培养好的营养肉汤菌悬液（浓菌液），接种于分离平板，置35~37℃培养18~24小时，用接种针选典型菌落划线于营养琼脂斜面，置35~37℃培养18~24小时。一般同时接种几支管，其中一支用于以后菌种传代或接种到半固体琼脂培养基中，其它用做工作菌种。 平板划线分离法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法 常用分离平板： 大肠埃希菌——EMB琼脂平板 紫黑色有金属光泽，表面光滑，圆形，凸起 铜绿假单胞菌——溴化十六烷三甲铵琼脂培养基扁平，无定形，周边扩散，表面湿润，灰白色，周围有蓝绿色素扩散 金黄色葡萄球菌——甘露醇氯化钠琼脂培养基 金黄色，圆形凸起，边缘整齐，外围有黄色环 沙门菌——SS琼脂平板 无色，透明或半透明，光滑湿润的圆形菌落  　　　　　 *  菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的生产、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种.微生物具有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此菌种保藏是一项重要的基础工作，是微生物学基础工作的一项重要内容，也是药品微生物工作中的一项常用技术。 一、菌种保藏的意义 如药品中的控制菌检查使用的阳性对照菌须防止因多次传代而使阳性对照菌的典型生物学特征发生变化及菌株的死亡，保证达到菌种长期正确的形态； 　　　如药品微生物学检验过程中，检出的可疑致病菌须妥善保藏，以达到进一步鉴定的目的，保证用药安全。 　　　许多国家都已建立了专门的菌种保藏机构，如美国标准菌种收藏所（ATCC）、英国的国立标准菌种收藏所（NCTC）、还有全球性的世界菌种保藏联合会（WFCC）。  二、菌种代号的意义 国内药品微生物检验所用的菌种代号是 CMCC（F）或 CMCC（B） CMCC —— 中国医学菌种保藏中心 B (Bacteria)代表细菌