大肠杆菌培养基配制及培养方法.docxVIP

大肠杆菌培养 一、菌种冻存液的制备 含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量 40%甘油， -80 oC 冻存。 二、培养基制备 LB 培养基配方（胰化蛋白胨（ Trypton ）： 10 g/L ；酵母提取物（ Yeast Extract ）：5 g/L ；NaCl：10 g/L ； pH 7.4 ） 液体培养基 胰化蛋白胨 10.0g 酵母粉 5.0g 氯化钠 10.0g 1000ml pH 7.4 固体培养基在液体培养基的基础上再加入 1.5 ％－ 2.0 ％的琼脂 三、平板的制备 1）称取胰化蛋白胨 10.0g ，酵母粉 5.0g ，NaCl 10.0g ，加入 800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用 1mol/L 的 NaOH调 pH至 7.4 左右，定容至 1L，调 pH 7.4 （若溶液 pH大于 7.4 ，用 1mol/L HCl 回调）。 2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。如需固体培养基在 分装后的液体培养基内加入约 2%的琼脂（ 150mL液体培养基加入 2.5g 琼脂）。3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。所有 锥形瓶如上述操作。用记号笔注明培养基名称、配制日期。 4）高压蒸汽灭菌锅 121 oC 灭菌 15min。 5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内 60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥