甲氨基阿维菌素苯甲酸盐BA质量分数的测定.docVIP

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a 质量分数的测定 4.3.1方法提要 试样用甲醇溶解，以甲醇、乙腈、水、三乙胺为流动相，使用以ODS(C18)为填充物的不锈钢柱和可变波长紫外检测器，对试样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a进行高效液相色谱分离和测定。 4.3.2试剂和溶液 三乙胺：分析纯； 甲醇：HPLC级，使用前经0.45μm滤膜过滤； 乙腈：HPLC级，使用前经0.45μm滤膜过滤； 水：二次蒸馏水，使用前经0.45μm滤膜过滤； 甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a标样：已知准确质量分数，≥97.0%。 4.3.3仪器 高效液相色谱仪，具245nm波长紫外检测器； 色谱数据工作站； 色谱柱：250mm×4.6mm（i.d.）不锈钢柱，内装填充料NUCLEODUR C18 Htec填充物，粒径5μm； 微量进样器：20μL。 4.3.4高效液相色谱操作条件 流动相：Ψ（乙腈：水：甲醇：三乙胺）＝497：50：2：0.2。 流动相流量：0.75mL/min。 柱温：28℃。 检测波长：245nm。 进样体积：5.0μL。 检测器灵敏度（AUFS）：0.03。 保留时间(附典型液相色谱图)(min)：甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a约为13min。 上述操作条件，系典型操作参数。可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。 4.3.5测定步骤 4.3.5.1标样溶液的配制 准确称取甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a标样0.05g(精确至0.0002g)，置于100mL容量瓶中，加入80mL甲醇，经超声波振荡溶解，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀备用。 4.3.5.2试样溶液的配制 准确称取含甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a0.05g (精确至0.0002g) 的试样，置于100mL容量瓶中，加入80mL甲醇，经超声波振荡溶解，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀备用。 4.3.5.3测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针甲氨基阿维菌素苯甲酸盐响应值相对变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。 4.3.6计算 将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a的峰面积分别进行平均。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a的质量分数X1（%），按式（1）计算： ………………………………………………（1） 式中： ——标样溶液中，甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a峰面积的平均值； ——试样溶液中，甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a峰面积的平均值； ——甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a标样的质量，g； ——试样的质量，g； ——标样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐B1a的质量分数，％。 4.3.7允许差 两次平行测定结果之差，应不大于0.1%。