实验四 微生物的菌落形态观察、平板菌落计数及菌种保藏.ppt

实 验 四微生物的菌落形态观察、平板菌落计数及菌种保藏;目的要求;实验内容;对于一个样品，针对微生物来说最想了解的问题（首要问题）;实 验 内 容 一——微生物菌落形态观察及区分;一、微生物的形态和菌落特征的比较表;二、细菌菌落形态的多样性（示意图）;;;;延展性较强的一些霉菌菌丝（松散）;平板中菌落形态;三、菌落特征描写方法;菌落形态可因培养基成分不同而发生显著变化（枯草芽孢杆菌在营养缺乏时形成的雪花状菌落）;四、各类型菌落的总体特征——反映细胞结构及特点;细菌的培养特征;细菌菌落扫描电镜显微照片;实 验 内 容 二——从分离平板上挑取单菌落;挑取细菌单菌落接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上——接种环 挑取放线菌单菌落接种于高氏1号培养基斜面上——接种环、接种钩 挑取霉菌单菌落接种于马丁氏培养基斜面上——接种环、接种钩;一般流程图（无菌操作）： 拿起平板并打开→用接种工具挑取单菌落→放于酒精灯外焰旁（不得过近？）→放下平板拿起斜面并取下塞子→用已粘有菌体的接种工具在斜面上划“之”字线或直线→接种工具取出、灼烧→塞好胶塞→作标记（菌种名称、接种人、接种日期等）。;接种斜面的演示图;;说明：;实 验 内 容 三——平板菌落计数;一、相关知识介绍;（3）菌体浊度的测定（只针对单细胞微生物）； 利用分光光度计在600nm测定吸光度值。 （4）细胞干重和湿重的测定（有时湿重以体积计量）； （5）各种细胞物质含量的测定（蛋白质、核酸、 ATP、磷、叶绿素等定量测定）——建立了多种快速检测方法； 说明：后两种对丝状菌比较有意义。;2、常见微生物检测项目;3、快速检测方法的现状;4、常规微生物快速检测技术现状;螺旋平板法;螺旋平板原理;快速检测微生物数量的新方法： （1）ATP法 （2）电化学法 （3）颜色变化 （4）流式细胞技术及激光扫描技术 （5）其它：热量法，放射测量法 说明：检测方法建立的基础——可测、稳定、重现、可行、简便;浊度与微生物生物量测定;二、平板菌落计数的优缺点;三、平板菌落计数的表述及计算;四、菌落计数原则（六条）; 2、首先选择平均菌落数在30～300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该样品的细菌总数（见下表，例1）。 3、若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则取其中稀释度(倍数)较小的计算菌落总数（见下表，例2及例3）。 ; 4、若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度(倍数)最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见下表，例4）。　 5、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度(倍数)最低的平均菌落数乘以稀释倍数（见下表，例5）。 6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见下表，例6）。;计算菌落总数方法举例（加样量为1mL）;针对计数原则的说明;;五、平板菌落计数结果的统计表;实 验 内 容 四——介绍菌种保藏的原理和方法;一、菌种保藏的重要性;二、菌种的衰退;三、菌种衰退的现象; ;五、菌种衰退的防止;六、菌种的复壮;七、菌种复壮的主要方法; 2、宿主体内复壮法 对于寄生性微生物的衰退菌株，可通过接种到相应昆虫或动植物宿主体内来提高菌株的毒性。 3、淘汰法 将衰退菌种进行一定的处理（如药物、低温、高温等），往往可以起到淘汰已衰退个体而达到复壮的目的。 4、遗传育种法 把退化的菌种重新进行遗传育种，从中再选出高产而不易退化的稳定性较好的生产菌种。;八、菌种保藏达到的目的;九、菌种保藏的基本原则;十、常采取的措施;十一、常见的方法;保护剂的选择;几种常用菌种保藏方法的比较;十二、菌种保藏的补充说明;宿主保藏法（针对专性寄生生命体）;十三、国内外菌种保藏机构;中国微生物菌种保藏机构名称和缩写 ;国际微生物菌种保藏机构名称和缩写 ;国际微生物菌种保藏机构名称和缩写 ;;思考题;另外的思考题（不需要做，仅思考）